Enzymatisk evaluering af generel anæstetika-induceret neurotoksicitet hos patienter med aneurysmal subaraknoidal blødning

Seksten patienter vil blive inkluderet i undersøgelsen under hver intervention (kirurgi eller endovaskulær coiling). I alt 32 patienter, der opfylder inklusionskriterierne, vil blive rekrutteret til undersøgelsen. Patienterne vil blive randomiseret i fire grupper for at modtage Propofol (Gruppe P), Isofluran (Gruppe I), Sevofluran (Gruppe S) eller Desfluran (Gruppe D) ved hjælp af en computergenereret algoritme til vedligeholdelse af anæstesi.

Operationen eller endovaskulær coiling vil blive udført af en erfaren neurokirurg eller radiolog, som vil blive blindet for det anæstesimiddel, der bruges til vedligeholdelse af anæstesi. Forbedøvelseskontrol vil blive udført før indgrebet. Patienten vil blive grundigt undersøgt, og alle undersøgelser vil blive gennemgået. Der vil blive indhentet skriftligt informeret samtykke fra patientens pårørende.

ANESTHESIA PROTOKOL:

Rutinemæssig non-invasive monitorer vil blive knyttet til patienterne. Det vil omfatte ikke-invasivt blodtryk (NIBP), hjertefrekvens (HR), elektrokardiografi (EKG), pulsoximetri (SpO2), kuldioxid i sluttiden (EtCO2), tilstandsentropi (SE) og urinproduktion. Alle patienter vil blive præloadet med 10-15 ml/kg normalt saltvand. Fentanyl vil blive administreret intravenøst ​​i en dosis på 2 µg/kg før induktion efterfulgt af 0,5-2 µg/kg/time som infusion. Patienter i alle 4 grupper vil blive induceret med propofol 1 til 2 mg/kg, titreret til tab af verbal respons. Vecuronium 0,1 mg/kg vil blive givet for at lette trakeal intubation. Lignocain 1,5 mg/kg vil blive givet 120 sekunder før laryngoskopi. For slag-til-slag-overvågning af blodtryk og blodgasanalyse vil et arteriekateter blive placeret efter induktion af anæstesi. Patienterne vil blive vedligeholdt i henhold til gruppetildelingen sammen med 50/50 % ilt/luft. BIS-monitorering vil blive brugt til at opretholde sammenlignelig dybde af anæstesi i alle grupperne og vil blive titreret for at holde SE i området 40 til 60. Vecuronium vil blive givet intermitterende for at opretholde mindre end to trækninger ved neurostimulering. Kropstemperaturen vil blive opretholdt ved hjælp af tvungen luftvarmetæppe.

Normalt saltvand vil blive brugt som den intraoperative væske. PaCO2 vil blive opretholdt omkring 32-36 mmHg. Neuromuskulær blokade vil blive vendt med en kombination af neostigmin 50 µg/kg og glycopyrrolat 10 µg/kg. Efterfølgende vil luftrøret blive ekstuberet.

De patienter, der ikke kan ekstuberes, vil blive flyttet til neurokirurgisk intensivafdeling for elektiv ventilatorstøtte.

Intraoperativ hæmodynamisk overvågning, midlertidig klippetid og enhver forekomst af aneurismeruptur vil blive noteret. Hjernebule på tidspunktet for dural refleksion vil blive bemærket. Patientstatus vil blive vurderet i slutningen af ​​operationen med hensyn til ekstubation og neurologisk status dvs. GCS.

STUDIEVARIABLER -

PREOPERATIV:

Demografiske data for patienten, dag for ictus, dag for indlæggelse på hospital, dag for operation, WFNS, Fischer karakterer og eventuelle komorbiditeter vil blive noteret. Neurologisk undersøgelse inklusive GCS og tilstedeværelse eller fravær af præoperativt neurologisk deficit vil også blive noteret.

INTRA OPERATIV:

Hjertefrekvens (HR), systolisk blodtryk (SBP), middel arterielt tryk (MAP), pulsoximetri (SpO2), temperatur og kuldioxid i sluttidevandet (EtCO2) vil blive noteret på tidspunktet for induktion, intubation, incision, påføring af hovedstifter, knogleklaprefleksion, Duralrefleksion, klipning, Durallukning, hudlukning og før ophør af anæstesi. Patienternes hjertefrekvens og blodtryk vil blive holdt så tæt på baseline som muligt. Enhver vedvarende stigning i BP med mere end 30 % af basislinjeværdierne vil blive betragtet som intraoperativ hypertension. Hypotension vil blive overvejet, hvis MAP < 70 mmHg eller SBP < 90 mmHg. Håndteringen af ​​hypertension eller hypotension vil være efter den behandlende anæstesiologs skøn.

Hjerneafspændingsscoringen vil blive udført efter knogleflap-refleksion ved hjælp af firepunktsskalaen. Den midlertidige klipningstid, intraoperativt brud af aneurisme, intraoperativ intravenøs væskeadministration, blodtab, urinproduktion vil blive noteret.

PROTOKOL FOR ENZYMUNDERSØGELSE OG ESTIMATION:

Patientens baseline cerebrospinalvæske (CSF) og serumblodprøve vil blive indsamlet. Baseline CSF vil blive opsamlet via et indlagt lumbalt subaraknoidalt kateter placeret før intervention som en modalitet for at forhindre komplikationen forbundet med SAH-lignende vasospasme og for at lette dræningen af ​​SAH. En venepunktur vil blive udført, og 2 til 3 ml blodprøve vil blive opsamlet i almindeligt hætteglas til serum/EDTA for plasma. Den anden CSF og serumblodprøve vil blive opsamlet efter 1 times eksponering for anæstesi. Den tredje prøve vil blive indsamlet efter afslutning af intervention eller efter ophør af bedøvelsesmidlet, alt efter hvad der er tidligere.

Caspase 3-enzymniveau ville blive estimeret ved hjælp af et kvantitativt ELISA-kit med præcoatede antigenbrønde og kendte standarder ved en dobbelt antistofsandwichteknik.

Prøveindsamling og opbevaring - Blodprøver ville blive opsamlet i almindelige hætteglas/vakutainere. CSF-prøver ville blive indsamlet i kryovials. Blodprøver ville få lov til at størkne ved stuetemperatur i 1 time. Det størknede blod i de almindelige vacutainere ville blive centrifugeret ved 2000 rpm i 15 minutter for at adskille serumet. Serum ville blive pipetteret af i kryovals. Alle prøver vil straks blive opbevaret ved -80˚C indtil videre analyse.

Caspase 3 enzym estimering Følgende trin vil blive fulgt for enzymatisk evaluering-

1. ELISA-sættet, der opbevares ved 40C, tages ud af køleskabet 20 minutter før testen udføres for at bringe det i ligevægt til stuetemperatur.
2. Forskellige koncentrationer af Human-caspase 3-standarder med kendte værdier og testprøver med ukendte værdier vil blive tilføjet til de coatede brønde i den præ-coatede mikroplade.
3. Biotinyleret human caspase 3 antistofvæske, enzymkonjugatvæske og farvereagens fremstilles 30 minutter før brug
4. Elisa-pladerne vaskes 3 gange ved at tilsætte 350 µl vaskebuffer til brøndene og tørres på adsorberende papirservietter mellem vaskene.
5. Biotinyleret human caspase 3 væske ville nu blive tilsat til hver brønd
6. Brøndene ville blive vasket 3 gange som beskrevet ovenfor i trin 4.
7. Enzymkonjugatvæske ville nu blive tilsat til de individuelle brønde i mikropladen
8. Brøndene ville blive vasket 3 gange som beskrevet ovenfor i trin 4 og 6 ovenfor.
9. Farvereagens (substratopløsning) tilsættes efterfulgt af stopopløsning
10. Optisk tæthed ville blive målt ved 450 nm ved hjælp af en mikroplade ELISA-læser
11. Værdier af ukendte prøver ville blive aflæst fra standardkurven genereret ved at plotte de optiske tætheder af kendte standarder mod deres kendte koncentrationer.