Enzymatisk evaluering av generell anestesiindusert nevrotoksisitet hos pasienter med aneurysmal subaraknoidalblødning

Seksten pasienter vil bli inkludert i studien under hver intervensjon (kirurgi eller endovaskulær coiling). Totalt trettito pasienter som oppfyller inklusjonskriteriene vil bli rekruttert til studien. Pasientene vil bli randomisert i fire grupper for å motta Propofol (Gruppe P), Isofluran (Gruppe I), Sevofluran (Gruppe S) eller Desfluran (Gruppe D) ved bruk av en datamaskingenerert algoritme for vedlikehold av anestesi.

Operasjonen eller endovaskulær coiling vil bli utført av en erfaren nevrokirurg eller radiolog som vil bli blindet for anestesimidlet som brukes til vedlikehold av anestesi. Pre-anestesikontroll vil bli utført før intervensjonen. Pasienten vil bli grundig undersøkt og alle undersøkelsene vil bli gjennomgått. Skriftlig informert samtykke innhentes fra pasientens pårørende.

ANESTHESIA PROTOKOLL:

Rutinemessige ikke-invasive monitorer vil bli festet til pasientene. Det vil inkludere ikke-invasivt blodtrykk (NIBP), hjertefrekvens (HR), elektrokardiografi (EKG), pulsoksymetri (SpO2), endetidal karbondioksid (EtCO2), tilstandsentropi (SE) og urinproduksjon. Alle pasienter vil forhåndsbelastes med 10-15 ml/kg normal saltvann. Fentanyl vil bli administrert intravenøst ​​i doser på 2 µg/kg før induksjon etterfulgt av 0,5-2 µg/kg/time som infusjon. Pasienter i alle 4 gruppene vil bli indusert med propofol 1 til 2 mg/kg, titrert til tap av verbal respons. Vecuronium 0,1 mg/kg vil bli gitt for å lette trakeal intubasjon. Lignokain 1,5 mg/kg vil bli gitt 120 sekunder før laryngoskopi. For slag til slag overvåking av blodtrykk og blodgassanalyse vil et arteriekateter bli plassert etter induksjon av anestesi. Pasienter vil bli vedlikeholdt i henhold til gruppetildelingen sammen med 50/50 % oksygen/luft. BIS-overvåking vil bli brukt for å opprettholde sammenlignbar dybde av anestesi i alle gruppene og vil bli titrert for å holde SE i området 40 til 60. Vecuronium vil bli gitt intermitterende for å opprettholde mindre enn to rykninger ved nevrostimulering. Kroppstemperaturen opprettholdes ved hjelp av varmeteppe med tvungen luft.

Normal saltvann vil bli brukt som intraoperativ væske. PaCO2 vil opprettholdes rundt 32-36 mmHg. Nevromuskulær blokade vil bli reversert med en kombinasjon av neostigmin 50 µg/kg og glykopyrrolat 10 µg/kg. Deretter vil luftrøret ekstuberes.

Pasientene som ikke kan ekstuberes vil bli flyttet til nevrokirurgisk intensivavdeling for elektiv respiratorstøtte.

Intraoperativ hemodynamisk overvåking, midlertidig klippetid og enhver forekomst av aneurismeruptur vil bli notert. Hjernebule på tidspunktet for dural refleksjon vil bli registrert. Pasientstatus vil bli vurdert ved slutten av operasjonen med tanke på ekstubasjon og nevrologisk status d.v.s. GCS.

STUDIEVARIABLER -

PREOPERATIV:

Demografiske data om pasienten, dag for ictus, dag for innleggelse på sykehus, dag for operasjon, WFNS, Fischer karakterer og eventuelle komorbiditeter vil bli notert. Nevrologisk undersøkelse inkludert GCS og tilstedeværelse eller fravær av preoperativt nevrologisk underskudd vil også bli notert.

INTRA OPERATIV:

Hjertefrekvens (HR), systolisk blodtrykk (SBP), gjennomsnittlig arterielt trykk (MAP), pulsoksymetri (SpO2), temperatur og endetidal karbondioksid (EtCO2) vil bli notert på tidspunktet for induksjon, intubasjon, snitt, påføring av hodepinner, beinklaffrefleksjon, Duralrefleksjon, klipping, Durallukking, hudlukking og før seponering av anestesi. Pasientens hjertefrekvens og blodtrykk vil holdes så nær baseline som mulig. Enhver vedvarende økning i BP med mer enn 30 % av baseline-verdiene vil bli betraktet som intraoperativ hypertensjon. Hypotensjon vil bli vurdert hvis MAP < 70 mmHg eller SBP < 90 mmHg. Håndteringen av hypertensjon eller hypotensjon vil skje etter den behandlende anestesilegen.

Poengsummen for hjerneavslapning vil bli gjort etter beinklaffrefleksjon ved bruk av firepunktsskala. Den midlertidige klippetiden, intraoperativ ruptur av aneurisme, intraoperativ intravenøs væskeadministrasjon, blodtap, urinproduksjon vil bli notert.

PROTOKOLL FOR ENZYMSTUDIE OG ESTIMERING:

Pasientens baseline cerebrospinalvæske (CSF) og serumblodprøve vil bli samlet inn. Baseline CSF vil bli samlet inn via et inneliggende lumbalt subaraknoidalt kateter plassert før intervensjon som en modalitet for å forhindre komplikasjoner forbundet med SAH som vasospasme og for å lette drenering av SAH. En venepunktur vil bli utført og 2 til 3 ml blodprøve vil bli samlet i vanlig hetteglass for serum/EDTA for plasma. Den andre CSF og serumblodprøven vil bli tatt etter 1 times eksponering for anestesi. Den tredje prøven vil bli tatt etter fullført intervensjon eller etter avsluttet anestesimiddel, avhengig av hva som inntreffer tidligere.

Caspase 3-enzymnivå vil bli estimert ved bruk av et kvantitativt ELISA-sett med forhåndsbelagte antigenbrønner og kjente standarder ved hjelp av en dobbel antistoffsandwichteknikk.

Prøveinnsamling og oppbevaring - Blodprøver vil bli samlet i vanlige hetteglass/vakutainere. CSF-prøver vil bli samlet inn i kryovialer. Blodprøver får lov til å koagulere ved romtemperatur i 1 time. Det koagulerte blodet i de vanlige vacutainerne ble sentrifugert ved 2000 rpm i 15 minutter for å skille ut serumet. Serum ville bli pipettert av i kryovialer. Alle prøver vil bli lagret ved -80˚C umiddelbart til videre analyse.

Caspase 3 enzym estimering Følgende trinn vil bli fulgt for enzymatisk evaluering-

1. ELISA-settet som er lagret ved 40C vil bli tatt ut av kjøleskapet 20 minutter før testen utføres for å ekvilibrere det til romtemperatur.
2. Ulik konsentrasjon av Human-caspase 3-standarder med kjente verdier og testprøver med ukjente verdier vil bli lagt til de belagte brønnene i den forhåndsbelagte mikroplaten.
3. Biotinylert human caspase 3 antistoffvæske, enzymkonjugatvæske og fargereagens tilberedes 30 minutter før bruk
4. Elisa-plater ble vasket 3 ganger ved å tilsette 350 µl vaskebuffer til brønnene og tørket på adsorberende papirhåndklær mellom vaskene.
5. Biotinylert human caspase 3 væske vil nå bli tilsatt til hver brønn
6. Brønnene vil bli vasket 3 ganger som beskrevet ovenfor i trinn 4.
7. Enzymkonjugatvæske vil nå bli tilsatt til de individuelle brønnene i mikroplaten
8. Brønnene vil bli vasket 3 ganger som beskrevet ovenfor ved trinn 4 og 6 ovenfor.
9. Fargereagens (substratløsning) tilsettes etterfulgt av stoppløsning
10. Optisk tetthet vil bli målt ved 450 nm ved bruk av en mikroplate ELISA-leser
11. Verdier av ukjente prøver vil bli lest av fra standardkurven generert ved å plotte de optiske tetthetene til kjente standarder mot deres kjente konsentrasjoner.