Enzymatische evaluatie van door algehele anesthesie veroorzaakte neurotoxiciteit bij patiënten met aneurysmale subarachnoïdale bloeding

Bij elke ingreep (chirurgie of endovasculaire coiling) zullen zestien patiënten worden opgenomen in het onderzoek. In totaal worden tweeëndertig patiënten die aan de inclusiecriteria voldoen, gerekruteerd voor het onderzoek. De patiënten worden gerandomiseerd in vier groepen om Propofol (Groep P), Isofluraan (Groep I), Sevofluraan (Groep S) of Desfluraan (Groep D) te krijgen met behulp van een door de computer gegenereerd algoritme om de anesthesie in stand te houden.

De operatie of endovasculaire coiling wordt uitgevoerd door een ervaren neurochirurg of radioloog die blind is voor het anestheticum dat wordt gebruikt om de anesthesie in stand te houden. Voorafgaand aan de ingreep vindt er een pre-anesthesie controle plaats. Patiënt wordt grondig onderzocht en alle onderzoeken worden doorgenomen. Schriftelijke geïnformeerde toestemming zal worden verkregen van de naaste familie van de patiënt.

ANESTHESIEPROTOCOL:

Routine niet-invasieve monitoren zullen aan de patiënten worden bevestigd. Het omvat niet-invasieve bloeddruk (NIBP), hartslag (HR), elektrocardiografie (ECG), pulsoximetrie (SpO2), kooldioxide aan het einde van de tijd (EtCO2), toestandsentropie (SE) en urineproductie. Alle patiënten krijgen vooraf 10-15 ml/kg normale zoutoplossing. Fentanyl wordt intraveneus toegediend in een dosis van 2 µg/kg voorafgaand aan de inductie, gevolgd door 0,5-2 µg/kg/uur als infuus. Patiënten in alle 4 de groepen zullen worden geïnduceerd met propofol 1 tot 2 mg/kg, getitreerd tot verlies van verbale respons. Vecuronium 0,1 mg/kg zal worden gegeven om tracheale intubatie te vergemakkelijken. Lignocaïne 1,5 mg/kg wordt 120 seconden vóór de laryngoscopie toegediend. Voor hartslagmeting van de bloeddruk en bloedgasanalyse wordt na inductie van de anesthesie een arteriële katheter geplaatst. Patiënten worden onderhouden volgens de groepstoewijzing samen met 50/50% zuurstof/lucht. BIS-monitoring zal worden gebruikt om een ​​vergelijkbare diepte van anesthesie in alle groepen te handhaven en zal worden getitreerd om SE binnen het bereik van 40 tot 60 te houden. Vecuronium zal met tussenpozen worden gegeven om minder dan twee spiertrekkingen op neurostimulatie te behouden. De lichaamstemperatuur wordt op peil gehouden met behulp van een geforceerde luchtverwarmingsdeken.

Normale zoutoplossing zal worden gebruikt als de intraoperatieve vloeistof. PaCO2 zal rond de 32-36 mmHg worden gehouden. De neuromusculaire blokkade wordt opgeheven met een combinatie van neostigmine 50 µg/kg en glycopyrrolaat 10 µg/kg. Vervolgens wordt de luchtpijp geëxtubeerd.

De patiënten die niet kunnen worden geëxtubeerd, worden overgeplaatst naar de neurochirurgische intensive care-afdeling voor electieve beademingsondersteuning.

Intra-operatieve hemodynamische monitoring, tijdelijke clipping-tijd en eventuele incidentie van aneurysmaruptuur zullen worden genoteerd. Hersenuitstulping op het moment van durale reflectie zal worden opgemerkt. De status van de patiënt zal aan het einde van de operatie worden beoordeeld in termen van extubatie en neurologische status, d.w.z. GCS.

ONDERZOEKSVARIABELEN -

PREOPERATIEF:

Demografische gegevens van de patiënt, dag van ictus, dag van opname in het ziekenhuis, dag van operatie, WFNS, Fischer-cijfers en eventuele comorbiditeiten worden genoteerd. Neurologisch onderzoek inclusief de GCS en aan- of afwezigheid van preoperatieve neurologische uitval zal ook worden genoteerd.

INTRA OPERATIEF:

Hartslag (HR), systolische bloeddruk (SBP), gemiddelde arteriële druk (MAP), pulsoximetrie (SpO2), temperatuur en end tidal carbon dioxide (EtCO2) worden genoteerd op het moment van inductie, intubatie, incisie, toepassing van nietstiften, botflapreflectie, Dural-reflectie, knippen, Dural-sluiting, huidsluiting en voorafgaand aan stopzetting van de anesthesie. De hartslag en bloeddruk van de patiënt worden zo dicht mogelijk bij de uitgangswaarde gehouden. Elke aanhoudende verhoging van de bloeddruk met meer dan 30% van de basislijnwaarden wordt beschouwd als intra-operatieve hypertensie. Hypotensie wordt overwogen als MAP < 70 mmHg of SBP < 90 mmHg. De behandeling van hypertensie of hypotensie is ter beoordeling van de behandelend anesthesioloog.

De score voor hersenrelaxatie zal worden gedaan na reflectie van de botflap met behulp van een vierpuntsschaal. De tijdelijke clipping-tijd, intra-operatieve aneurysma-ruptuur, intra-operatieve intraveneuze vloeistoftoediening, bloedverlies, urineproductie worden genoteerd.

PROTOCOL VOOR ENZYMONDERZOEK EN SCHATTING:

De baseline cerebrospinale vloeistof (CSF) en serumbloedmonster van de patiënt zullen worden verzameld. De basislijn CSF zal worden verzameld via een inwonende lumbale subarachnoïdale katheter die voorafgaand aan de interventie wordt geplaatst als een modaliteit om de complicatie geassocieerd met SAH zoals vasospasme te voorkomen en om de drainage van SAH te vergemakkelijken. Er wordt een aderpunctie uitgevoerd en er wordt 2 tot 3 ml bloedmonster afgenomen in een gewoon flesje voor serum/EDTA voor plasma. Het tweede CSF- en serumbloedmonster wordt na 1 uur blootstelling aan anesthesie afgenomen. Het derde monster wordt genomen na voltooiing van de ingreep of na stopzetting van het anestheticum, afhankelijk van wat zich het eerst voordoet.

Caspase 3-enzymniveau zou worden geschat met behulp van een kwantitatieve ELISA-kit met voorgecoate antigeenputjes en bekende standaarden door middel van een dubbele antilichaam-sandwichtechniek.

Monsterafname en opslag - Bloedmonsters worden verzameld in gewone flesjes/vacutainers. CSF-monsters zouden worden verzameld in cryovials. Bloedmonsters zouden gedurende 1 uur bij kamertemperatuur kunnen stollen. Het gestolde bloed in de gewone vacutainers zou gedurende 15 minuten bij 2000 rpm worden gecentrifugeerd om het serum af te scheiden. Serum zou in cryoflesjes worden gepipetteerd. Alle monsters zouden onmiddellijk bij -80˚C worden bewaard tot verdere analyse.

Caspase 3-enzymschatting De volgende stappen worden gevolgd voor enzymatische evaluatie-

1. De ELISA-kit die bij 40°C wordt bewaard, wordt 20 minuten voor het uitvoeren van de test uit de koelkast gehaald om hem op kamertemperatuur te brengen.
2. Verschillende concentraties van Human-caspase 3-standaarden met bekende waarden en testmonsters met onbekende waarden zouden worden toegevoegd aan de gecoate putjes in de voorgecoate microtiterplaat.
3. Gebiotinyleerde menselijke caspase 3-antilichaamvloeistof, enzymconjugaatvloeistof en kleurreagens worden 30 minuten voor gebruik bereid
4. Elisa-platen zouden 3 keer worden gewassen door 350 µl wasbuffer aan de putjes toe te voegen en tussen de wasbeurten door op adsorberende papieren handdoeken gedroogd.
5. Gebiotinyleerde menselijke caspase 3-vloeistof zou nu aan elk putje worden toegevoegd
6. De putjes zouden 3 keer worden gewassen zoals hierboven beschreven bij stap 4.
7. Enzymconjugaatvloeistof zou nu worden toegevoegd aan de individuele wells in de microtiterplaat
8. De putjes zouden 3 keer worden gewassen zoals hierboven beschreven bij stappen 4 en 6 hierboven.
9. Kleurreagens (substraatoplossing) zou worden toegevoegd, gevolgd door stopoplossing
10. De optische dichtheid zou worden gemeten bij 450 nm met behulp van een microplaat-ELISA-lezer
11. Waarden van onbekende monsters zouden worden afgelezen van de standaardcurve die wordt gegenereerd door de optische dichtheden van bekende standaarden uit te zetten tegen hun bekende concentraties.