동맥류 지주막하출혈 환자에서 전신마취로 인한 신경독성의 효소적 평가

16명의 환자가 각 중재(수술 또는 혈관내 코일링)에 따라 연구에 포함될 것입니다. 포함 기준을 충족하는 총 32명의 환자가 연구에 모집될 것입니다. 환자는 마취 유지를 위해 컴퓨터 생성 알고리즘을 사용하여 Propofol(그룹 P), Isoflurane(그룹 I), Sevoflurane(그룹 S) 또는 Desflurane(그룹 D)을 투여하기 위해 4개 그룹으로 무작위 배정됩니다.

수술 또는 혈관내 코일링은 마취 유지를 위해 사용되는 마취제를 알지 못하는 경험이 풍부한 신경외과 의사 또는 방사선과 의사에 의해 수행됩니다. 마취 전 검사는 개입 전에 수행됩니다. 환자를 철저히 검사하고 모든 조사를 검토합니다. 서면 동의서는 환자의 가장 가까운 친척으로부터 얻을 것입니다.

마취 프로토콜:

일상적인 비침습적 모니터가 환자에게 부착됩니다. 여기에는 비침습적 혈압(NIBP), 심박수(HR), 심전도(ECG), 맥박 산소 측정(SpO2), 호기말 이산화탄소(EtCO2), 상태 엔트로피(SE) 및 소변 배출량이 포함됩니다. 모든 환자는 10-15ml/kg의 생리 식염수를 사전 로드합니다. 펜타닐은 유도 전에 2μg/kg의 용량으로 정맥 투여한 후 0.5-2μg/kg/시간을 주입합니다. 4개 그룹 모두의 환자에게 프로포폴 1~2mg/kg을 투여하고 언어 반응이 소실될 때까지 적정합니다. 기관 삽관을 용이하게 하기 위해 Vecuronium 0.1mg/kg을 투여합니다. Lignocaine 1.5mg/kg은 후두경 검사 120초 전에 제공됩니다. 혈압 및 혈액 가스 분석의 박동 모니터링을 위해 마취 유도 후 동맥 카테터를 배치합니다. 환자는 50/50% 산소/공기와 함께 그룹 할당에 따라 유지됩니다. BIS 모니터링은 모든 그룹에서 비슷한 마취 깊이를 유지하는 데 사용되며 SE를 40에서 60 범위로 유지하도록 적정됩니다. 강제 공기 보온 담요를 사용하여 체온을 유지합니다.

생리 식염수는 수술 중 수액으로 사용됩니다. PaCO2는 약 32-36mmHg로 유지됩니다. 신경근 차단은 네오스티그민 50µg/kg과 글리코피롤레이트 10µg/kg의 조합으로 역전됩니다. 그 후 기관이 발관됩니다.

발관이 불가능한 환자는 선택적 인공호흡기 지원을 위해 신경외과 집중 치료실로 이송됩니다.

수술 중 혈역학 모니터링, 일시적 클립핑 시간 및 동맥류 파열 발생률이 기록됩니다. 경막 반사시 뇌 팽창이 주목됩니다. 환자 상태는 발관 및 신경학적 상태 즉, 수술 종료 시 평가됩니다. GCS.

연구 변수 -

수술 전:

환자의 인구통계학적 데이터, 발작일, 병원 입원일, 수술일, WFNS, Fischer 등급 및 모든 동반이환이 기록됩니다. GCS를 포함한 신경학적 검사 및 수술 전 신경학적 결함의 유무도 기록됩니다.

내부 요원:

심박수(HR), 수축기 혈압(SBP), 평균 동맥압(MAP), 맥박 산소 측정(SpO2), 온도 및 호기말 이산화탄소(EtCO2)는 유도, 삽관, 절개, 머리 핀, 뼈 플랩 반사, 경막 반사, 클리핑, 경막 폐쇄, 피부 폐쇄 및 마취 중단 전. 환자의 심박수와 혈압은 가능한 한 기준선에 가깝게 유지됩니다. 기본 값의 30% 이상 혈압이 지속적으로 증가하면 수술 중 고혈압으로 간주됩니다. MAP < 70mmHg 또는 SBP < 90mmHg인 경우 저혈압이 고려됩니다. 고혈압 또는 저혈압의 관리는 담당 마취과 의사의 재량에 따릅니다.

뇌 이완 점수는 4점 척도를 사용하여 뼈 플랩 반사에 따라 수행됩니다. 임시 클리핑 시간, 동맥류의 수술 중 파열, 수술 중 정맥 수액 투여, 혈액 손실, 소변 배출이 기록됩니다.

효소 연구 및 추정을 위한 프로토콜:

환자의 기준선 뇌척수액(CSF) 및 혈청 혈액 샘플을 수집합니다. 기저선 CSF는 혈관경련과 같은 SAH와 관련된 합병증을 예방하고 SAH의 배액을 촉진하기 위한 양식으로서 개입 전에 배치된 유치 요추 지주막하 카테터를 통해 수집될 것입니다. 정맥 천자를 하고 혈청용 일반 바이알/혈장용 EDTA에 2~3ml의 혈액 샘플을 수집합니다. 두 번째 CSF 및 혈청 혈액 샘플은 마취에 노출된 지 1시간 후에 수집됩니다. 세 번째 샘플은 개입 완료 후 또는 마취제 중단 후 중 더 빠른 시점에 수집됩니다.

Caspase 3 효소 수준은 미리 코팅된 항원 웰과 이중 항체 샌드위치 기술로 알려진 표준이 있는 정량적 ELISA 키트를 사용하여 추정됩니다.

샘플 수집 및 보관 - 혈액 샘플은 일반 바이알/백큐테이너에 수집됩니다. CSF 샘플은 cryovials에서 수집됩니다. 혈액 샘플은 실온에서 1시간 동안 응고될 수 있습니다. 평범한 vacutainer의 응고된 혈액은 혈청을 분리하기 위해 15분 동안 2000rpm에서 원심분리됩니다. 혈청은 냉동 바이알로 피펫팅됩니다. 모든 샘플은 추가 분석까지 즉시 -80˚C에서 보관됩니다.

카스파제 3 효소 평가 효소 평가를 위해 다음 단계를 따를 것입니다.

1. 40C에 보관된 ELISA 키트는 테스트를 수행하기 20분 전에 냉장고에서 꺼내 상온과 평형을 유지합니다.
2. 알려진 값을 가진 다양한 농도의 인간-카스파제 3 표준과 알 수 없는 값을 가진 테스트 샘플이 사전 코팅된 마이크로플레이트의 코팅된 웰에 추가됩니다.
3. Biotinylated Human caspase 3 항체 액, 효소 결합액 및 발색 시약은 사용 30분 전에 준비합니다.
4. Elisa 플레이트는 350μl의 세척 완충액을 웰에 추가하여 3회 세척하고 세척 사이에 흡착 종이 타월로 건조합니다.
5. Biotinylated Human caspase 3 액체가 이제 각 웰에 추가됩니다.
6. 우물은 4단계에서 위에서 설명한 대로 3번 세척됩니다.
7. 이제 효소 결합액이 마이크로플레이트의 개별 웰에 추가됩니다.
8. 위의 4단계와 6단계에서 설명한 대로 웰을 3번 세척합니다.
9. 착색 시약(기질 용액)을 첨가한 후 정지 용액을 첨가합니다.
10. 광학 밀도는 마이크로플레이트 ELISA 판독기를 사용하여 450nm에서 측정됩니다.
11. 알려지지 않은 샘플의 값은 알려진 농도에 대한 알려진 표준의 광학 밀도를 플로팅하여 생성된 표준 곡선에서 판독됩니다.