韓国人被験者のディープ フェノタイピングのための PAH プラットフォーム (PHOENIKS)

研究の目的 現在の研究は、PAH の分子的および遺伝的修飾因子を解明するためのデータベースを構築するための、韓国の人口に基づく多施設レジストリおよびバイオバンクです。 最終的な目標は、予後予測とバイオマーカーおよび標的療法の発見に深い表現型データを利用することです。

研究サンプル 現在の研究では、まず、韓国で最も頻度の高い形態の PAH である結合組織病 (CTD) 関連の PAH を除外し、特発性 PAH (IPAH) および遺伝性 PAH (HPAH) 患者の診断と詳細な表現型解析に焦点を当てます。 選択基準は次のとおりです。(1) 18 歳以上、(2) 右心カテーテル法 (RHC) で確認された平均肺動脈圧が 25mmHg 以上、(3) 肺血管抵抗が 240 ダイン・秒・cm- 5、(4) 左心室拡張期圧 (LVDEP) または肺毛細血管楔入圧 (PCWP) ≤ 15mmHg。 除外基準は次のとおりです: (1) 薬物誘発性PAH、(2) CTD、ヒト免疫不全ウイルス (HIV) 感染症、門脈圧亢進症、先天性心疾患、または住血吸虫症関連PAHの患者、(3) カルシウムに対する長期応答者チャネルブロッカー、（4）静脈毛細血管の関与の明白な特徴を有するPAH患者、評価されるPHのグループ1にIPAHおよびHPAH患者が残る。 HPAH は、BMPR2、ACVRL1、ENG、CAV1、SMAD1、SMAD4、SMAD9、KCNK3、および EIF2AK4 などの所定の遺伝子のヘテロ接合病原性バリアントを有する患者を特定することによって診断されます。 特定の遺伝子変異のない患者は、IPAH 患者として分類されます。 HPAH 患者の 3 つの家系にまたがる家族のゲノム データも分析されます。 すべての臨床および生物学的データは、韓国疾病管理センターが管理する iCReT システムと呼ばれる、カスタマイズされた Web ベースの症例報告フォームに報告されます。 採取されたすべての生体試料は、韓国国立衛生研究所のメインストレージに保管されます。 現在の分析は IPAH および HPAH 患者に限定される予定ですが、当社の運営委員会はその後の研究ですべてのタイプの PAH に拡大する予定です。 この研究は、各参加機関の機関倫理委員会によって承認され、ヘルシンキ宣言 (第 6 回改訂) に準拠していました。 インフォームド コンセントは、各患者によって受信されます。

ベースライン データと生体試料の収集 16 の地域病院全体で登録された患者からのベースライン データには、次のものが含まれます。 、オプションの心臓 MRI、および RHC。 各試験の詳細情報を表 2 に示します。 登録された患者は、さらなるデータと生体試料の収集のために定期的にフォローアップされます。

患者の血液サンプルでは、​​DNA、RNA、血清、血漿、およびバフィーコートからの末梢血単核細胞 (PBMC) が分離され、さらなる保存と研究のために抽出されます。 DNAサンプルは、採取場所で全血2.5mlをPAX遺伝子DNAチューブに保存し、4～10℃でメインセンターに運びます。メインセンターでは、 -70~80℃で保存するために2mlのクライオチューブに移します。 患者の RNA 採取には、全血 2.5 mL が PAX 遺伝子 RNA チューブに採取され、4～10℃でメインセンターに送られ、さらにクライオチューブに移され、-70～で保存されます。 80℃。

患者の血清、血漿、およびバフィーコートも収集されます。 それぞれの採取部位において、血清を血清分離チューブに採取し、30分間静脈穿刺後、遠心分離し、-20℃で保存する。 患者の血漿については、採血後 2 時間以内に細胞調製チューブを使用します。 次に、サンプルをヒト血清型抗体、DMSO、および凍結培地で処理することにより、各サンプルを-20℃で保存する準備が整います。 PBMC を分離抽出するために、白いバフィー コート層を分離し、1.5 ml チューブに凍結培地を入れて -20℃ で保存します。 収集されたベースライン データはクリーンアップ プロセスを経て、その品質がさらに評価されます。 さらに、全ゲノム配列決定を行うために 5 人の患者が選択されます。 収集されたすべての生体試料は NIH センター ストレージに寄付され、患者の標本の深い表現型を調べるためのマルチオミクス研究にさらに使用されます。

患者のフォローアップ すべての患者は年に 2 回以上フォローアップされ、80% のフォローアップ率が期待されます。 2 年目と 3 年目の間、患者登録とデータ収集は同じプロトコルで継続されます。 収集されたデータの信頼性を維持するために、運営委員会は収集されたデータを継続的に監視および監査します。 プロトコルは、前年のデータを評価した後にさらに作成される可能性があります。 さらに、患者の身体測定と血液サンプルを標準化するためのガイドラインを含む、効果的なデータ管理戦略が開発されます。 次世代シークエンシングのために10人の患者サンプルが選択され、新しい遺伝子変異の発見に利用されます。

HPAH患者の3家系にわたる遺伝子突然変異分析 HPAH患者を決定するために、家族の遺伝子研究が実施される。 BMPR2、ACVRL1、ENG、CAV1、SMAD1、SMAD4、SMAD9、KCNK3、および/またはEIF2AK4突然変異の存在の有無にかかわらず、各PAH患者の3世代の家系が評価されます。 HPAH患者の家族からの血液サンプルは、遺伝子スクリーニングのために収集されます。