Платформа PAH для глубокого фенотипирования корейских субъектов (PHOENIKS)

Цели исследования Настоящее исследование представляет собой многоцентровый реестр и биобанк на основе популяций Южной Кореи для создания базы данных для выяснения молекулярных и генетических модификаторов ЛАГ. Конечной целью является использование глубоких фенотипических данных для предсказания прогноза и открытия биомаркеров и целевых методов лечения.

Образец исследования Настоящее исследование изначально будет исключать наиболее частую форму ЛАГ в Корее, ЛАГ, связанную с заболеванием соединительной ткани (ЗСТ), и сосредоточится на диагностике и глубоком фенотипировании пациентов с идиопатической ЛАГ (ИЛАГ) и наследственной ЛАГ (ГЛАГ). Критерии включения следующие: (1) возраст старше 18 лет, (2) среднее давление в легочной артерии 25 мм рт. ст. или выше, подтвержденное катетеризацией правых отделов сердца (RHC), (3) легочное сосудистое сопротивление ≥ 240 дин∙с∙см- 5, (4) диастолическое давление левого желудочка (LVDEP) или давление заклинивания легочных капилляров (PCWP) ≤ 15 мм рт.ст. Критериями исключения являются: (1) пациенты с лекарственной ЛАГ, (2) ЗСТ, инфекция вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), портальная гипертензия, врожденный порок сердца или ЛАГ, связанная с шистосомозом, (3) длительно реагирующие на кальций блокаторы каналов, (4) пациенты с ЛАГ с явными признаками поражения венозных капилляров, оставляя пациентов с ИЛАГ и ГЛАГ среди группы 1 ЛГ, подлежащей оценке. HPAH будет диагностирован путем выявления пациентов с гетерозиготными патогенными вариантами предопределенных генов, таких как BMPR2, ACVRL1, ENG, CAV1, SMAD1, SMAD4, SMAD9, KCNK3 и EIF2AK4. Пациенты без специфической генетической мутации будут классифицированы как пациенты с ИЛАГ. Также будут проанализированы геномные данные членов семьи по трем родословным пациента с HPAH. Все клинические и биологические данные будут передаваться в настраиваемую веб-форму отчета о случаях заболевания, которая называется системой iCReaT, управляемой Корейским центром по контролю за заболеваниями. Все собранные биообразцы будут храниться в основном хранилище Корейского национального института здравоохранения. Хотя текущий анализ планируется ограничить пациентами с ИЛАГ и ГЛАГ, наш руководящий комитет планирует расширить его до всех типов ЛАГ в последующих исследованиях. Это исследование было одобрено институциональным комитетом по этике каждого участвующего учреждения и соответствовало Хельсинкской декларации (6-я редакция). Информированное согласие будет получено каждым пациентом.

Исходные данные и сбор биопрепаратов Исходные данные от зарегистрированных пациентов в 16 региональных больницах будут включать следующее: функциональная классификация ВОЗ, тест с 6-минутной ходьбой, образец крови, электрокардиограмма, рентгенография грудной клетки, эхокардиография, дополнительный легочно-кардиографический тест с физической нагрузкой. , дополнительная МРТ сердца и RHC. Подробная информация о каждом экзамене указана в Таблице 2. За зарегистрированным пациентом будет наблюдаться на регулярной основе для получения дополнительных данных и сбора биопроб.

В образце крови пациента ДНК, РНК, сыворотка, плазма и мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) из лейкоцитарной пленки будут отделены и извлечены для дальнейшего хранения и исследований. Для образца ДНК 2,5 мл цельной крови будут храниться в пробирке с ДНК гена PAX в месте сбора, и она будет доставлена ​​​​в главный центр при температуре 4–10 ° C. Затем в главном центре она будет, следует перенести в криопробирку объемом 2 мл для хранения при температуре от -70 до 80°С. Для сбора РНК пациента будет собрано 2,5 мл цельной крови в пробирке для РНК гена PAX, и она будет отправлена ​​​​в главный центр при температуре 4 ~ 10 ° C, которая также будет далее перенесена в криопробирку для хранения при -70 ° C. 80С.

Также будут собраны сыворотка, плазма и лейкоцитарная пленка пациента. В соответствующих местах сбора сыворотку собирают в пробирку для разделения сыворотки, а через 30 минут после венепункции центрифугируют и хранят при температуре -20°С. Для плазмы пациента пробирка для подготовки клеток будет использована в течение 2 часов после забора крови. Затем каждый образец будет готов к хранению при температуре -20°C путем обработки образцов антителами типа сыворотки человека, ДМСО и средой для замораживания. Для отделения и экстракции РВМС отделяют белый лейкоцитарный слой и хранят в пробирке объемом 1,5 мл с замораживающей средой при температуре -20°С. Собранные исходные данные затем проходят процесс очистки, после чего проводится дальнейшая оценка их качества. Кроме того, пять пациентов будут отобраны для проведения полногеномного секвенирования. Все собранные биообразцы будут переданы в хранилище центра NIH и в дальнейшем будут использоваться для мультиомных исследований с целью глубокого фенотипирования образцов пациентов.

Последующее наблюдение за пациентами Все пациенты будут наблюдаться два или более раз в год с ожидаемой частотой наблюдения 80%. В течение второго и третьего года регистрация пациентов и сбор данных будут продолжаться по тому же протоколу. Чтобы поддерживать достоверность собранных данных, руководящий комитет будет постоянно контролировать и проверять собранные данные. Протокол может быть доработан после оценки данных за предыдущий год. Кроме того, будут разработаны эффективные стратегии управления данными, в том числе руководство по стандартизации измерений тела пациента и образца крови. Десять образцов пациентов будут отобраны для секвенирования следующего поколения, и нас будут использовать для обнаружения новых генетических мутаций.

Анализ генетических мутаций по трем родословным для пациентов с HPAH Для выявления пациентов с HPAH будет проведено семейное генетическое исследование. Будет оцениваться родословная трех поколений для каждого пациента с ЛАГ с наличием или отсутствием мутации BMPR2, ACVRL1, ENG, CAV1, SMAD1, SMAD4, SMAD9, KCNK3 и/или EIF2AK4. Образцы крови членов семей пациентов с HPAH будут взяты для генетического скрининга.