한국 피험자의 심층 표현형 분석을 위한 PAH 플랫폼 (PHOENIKS)

연구 목적 현재 연구는 PAH의 분자 및 유전적 변형 인자를 규명하기 위한 데이터베이스를 구축하기 위해 한국 인구를 기반으로 하는 다기관 레지스트리 및 바이오뱅크입니다. 궁극적인 목표는 예후 예측과 바이오마커 및 표적 치료법의 발견을 위해 깊은 표현형 데이터를 활용하는 것입니다.

연구 샘플 본 연구는 초기에 국내에서 가장 흔한 PAH 형태인 CTD(connective tissue disease) 관련 PAH를 제외하고 특발성 PAH(IPAH) 및 유전성 PAH(HPAH) 환자의 진단 및 심층 표현형 분석에 중점을 둘 것입니다. 선정 기준은 다음과 같다: (1) 18세 이상, (2) 우심장 카테터 삽입술(RHC)로 확인된 평균 폐동맥압 25mmHg 이상, (3) 폐혈관 저항 ≥ 240 dynes∙s∙cm- 5, (4) 좌심실 확장기 압력(LVDEP) 또는 폐 모세관 쐐기 압력(PCWP) ≤ 15mmHg. 제외 기준은 다음과 같습니다: (1) 약물 유발성 PAH 환자, (2) CTD, 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 감염, 문맥 고혈압, 선천성 심장 질환 또는 PAH 관련 주혈흡충증, (3) 칼슘에 대한 장기 반응자 채널 차단제, (4) 정맥 모세관 침범의 명백한 특징이 있는 PAH 환자, 평가할 PH의 그룹 1 중에서 IPAH 및 HPAH 환자를 남겨 둡니다. HPAH는 BMPR2, ACVRL1, ENG, CAV1, SMAD1, SMAD4, SMAD9, KCNK3 및 EIF2AK4와 같은 미리 결정된 유전자의 이형 병원성 변이를 가진 환자를 식별하여 진단할 것입니다. 특정 유전자 돌연변이가 없는 환자는 IPAH 환자로 분류됩니다. HPAH 환자의 3개 가계에 걸친 가족 구성원의 게놈 데이터도 분석됩니다. 모든 임상 및 생물학적 데이터는 질병관리본부에서 관리하는 iCReaT 시스템이라는 맞춤형 웹 기반 증례 보고 양식으로 보고됩니다. 수집된 모든 생체 시료는 국립보건원 주보관소에 보관됩니다. 현재 분석은 IPAH 및 HPAH 환자로 제한할 계획이지만, 운영 위원회는 후속 연구에서 모든 유형의 PAH로 확장할 계획입니다. 본 연구는 각 참여기관의 기관윤리위원회의 승인을 받았으며 헬싱키 선언(6차 개정)을 준수하였다. 각 환자는 정보에 입각한 동의를 받게 됩니다.

기준 데이터 및 생물 표본 수집 16개 지역 병원에 등록된 환자의 기준 데이터에는 다음이 포함됩니다. , 선택적 심장 MRI 및 RHC. 각 시험에 대한 자세한 정보는 표 2에 명시되어 있습니다. 등록된 환자는 추가 데이터 및 생물 표본 수집을 위해 정기적으로 후속 조치를 받게 됩니다.

환자의 혈액 샘플을 사용하여 버피 코트에서 DNA, RNA, 혈청, 혈장 및 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 분리하고 추출하여 추가 보관 및 연구를 수행합니다. DNA 샘플은 전혈 2.5ml를 채취장소에서 PAX 유전자 DNA 튜브에 보관하고 4~10℃의 메인센터로 운반한다. 2ml cryotube에 옮겨 -70~80C에 보관합니다. 환자의 RNA 채취를 위해 2.5mL의 전혈을 PAX 유전자 RNA 튜브에 채취하여 4~10C의 메인 센터로 보내고 다시 cryotube로 옮겨 -70~에 보관합니다. 섭씨 80도

환자의 혈청, 혈장 및 연막도 수집됩니다. 각 채취장소에서 혈청분리관에 혈청을 채취하고 30분 정맥천자 후 원심분리하여 -20C에서 보관한다. 환자 혈장의 경우 채혈 후 2시간 이내에 세포 준비 튜브를 사용합니다. 그런 다음 각 샘플은 인간 혈청 유형 항체, DMSO 및 동결 배지로 샘플을 처리하여 -20C에서 보관할 준비가 됩니다. PBMC를 분리 추출하기 위해 백색 Buffy Coat 층을 분리하여 -20C의 동결 배지와 함께 1.5ml 튜브에 보관합니다. 수집된 기본 데이터는 정리 프로세스를 거치고 품질에 대한 추가 평가가 수행됩니다. 또한 전체 게놈 시퀀싱을 수행할 5명의 환자가 선택됩니다. 수집된 모든 생체 표본은 NIH 센터 보관소에 기증되며, 환자 표본의 심층 표현형 분석을 위한 다중 오믹스 연구에 추가로 사용될 것입니다.

환자 후속 조치 모든 환자는 1년에 2회 이상 후속 조치를 받게 되며, 예상 후속 조치 비율은 80%입니다. 2년차 및 3년차 동안 환자 등록 및 데이터 수집은 동일한 프로토콜로 계속됩니다. 수집된 데이터의 신뢰성을 유지하기 위해 운영위원회는 수집된 데이터를 지속적으로 모니터링하고 감사합니다. 전년도 데이터를 평가한 후 프로토콜을 추가로 만들 수 있습니다. 또한 환자의 신체 측정 및 혈액 샘플을 표준화하기 위한 가이드라인을 포함하여 효과적인 데이터 관리 전략이 개발될 것입니다. 차세대 시퀀싱을 위해 10명의 환자 샘플을 선택하여 새로운 유전자 변이를 발견하는 데 활용할 것입니다.

HPAH 환자에 대한 3계통에 걸친 유전자 돌연변이 분석 HPAH 환자를 결정하기 위해 가족 유전 연구가 수행됩니다. BMPR2, ACVRL1, ENG, CAV1, SMAD1, SMAD4, SMAD9, KCNK3 및/또는 EIF2AK4 돌연변이가 있거나 없는 각 PAH 환자에 대한 3세대 혈통이 평가될 것입니다. 유전자 검사를 위해 HPAH 환자 가족의 혈액 샘플을 수집합니다.