A PAH-platform mély fenotipizáláshoz koreai alanyokban (PHOENIKS)

A tanulmány célkitűzései A jelenlegi tanulmány egy dél-koreai populációkon alapuló többközpontú regiszter és biobank, amely adatbázist hoz létre a PAH molekuláris és genetikai módosítóinak felderítésére. A végső cél a mély fenotípusos adatok felhasználása a prognózis előrejelzésére és a biomarkerek és a célzott terápiák felfedezésére.

Vizsgálati minta A jelenlegi vizsgálat kezdetben kizárja a PAH leggyakoribb formáját Koreában, a kötőszöveti betegséggel (CTD) kapcsolatos PAH-t, és az idiopátiás PAH (IPAH) és az örökletes PAH (HPAH) betegek diagnosztizálására és mély fenotipizálására összpontosít. A felvételi kritériumok a következők: (1) 18 éves kor felett, (2) 25 Hgmm vagy magasabb átlagos pulmonális artériás nyomás, jobb szív katéterezéssel (RHC) igazolva, (3) pulmonalis vaszkuláris rezisztencia ≥ 240 din∙s∙cm- 5, (4) a bal kamra diasztolés nyomása (LVDEP) vagy a pulmonalis kapilláris éknyomás (PCWP) ≤ 15 Hgmm. Kizárási kritériumok a következők: (1) gyógyszer által kiváltott PAH-ban szenvedő betegek, (2) CTD-ben, humán immundeficiencia vírus (HIV) fertőzésben, portális hipertóniában, veleszületett szívbetegségben vagy Schistosomiasis-asszociált PAH-ban szenvedő betegek, (3) kalciumra tartósan reagáló betegek csatornablokkolók, (4) PAH-betegek, akiknél nyilvánvaló a vénás kapillárisok érintettsége, így az IPAH és HPAH betegek a PH 1. csoportjába tartoznak. A HPAH-t előre meghatározott gének, például BMPR2, ACVRL1, ENG, CAV1, SMAD1, SMAD4, SMAD9, KCNK3 és EIF2AK4 heterozigóta patogén variánsaival rendelkező betegek azonosításával diagnosztizálják. A specifikus genetikai mutációval nem rendelkező betegeket ezután az IPAH-betegek közé sorolják. Egy HPAH-beteg 3 törzskönyvében szereplő családtagok genomiális adatait is elemezzük. Minden klinikai és biológiai adatot a Koreai Betegségellenőrzési Központ által kezelt iCReaT rendszernek nevezett, testreszabott webalapú esetjelentési űrlapon jelentenek. Az összes begyűjtött biomintát a Koreai Nemzeti Egészségügyi Intézet főtárolójában tárolják. Bár a jelenlegi elemzés a tervek szerint az IPAH-ban és a HPAH-ban szenvedő betegekre korlátozódik, irányítóbizottságunk azt tervezi, hogy a későbbi vizsgálatok során a PAH valamennyi típusára kiterjed. Ezt a tanulmányt minden részt vevő intézmény intézményi etikai bizottsága jóváhagyta, és megfelelt a Helsinki Deklarációnak (6. revízió). Minden beteg tájékoztatáson alapuló beleegyezését kapja.

Kiindulási adatok és biomintagyűjtés A 16 regionális kórházban regisztrált betegek kiindulási adatai a következőket tartalmazzák: WHO funkcionális besorolás, 6 perces sétateszt, vérminta, elektrokardiogram, mellkasröntgen, echokardiográfia, opcionális pulmonalis-kardio terhelési teszt. , opcionális szív MRI és RHC. Az egyes vizsgák részletes adatait a 2. táblázat tartalmazza. A regisztrált pácienst rendszeresen nyomon követik további adatok és biomintagyűjtés céljából.

A páciens vérmintájával a DNS-t, az RNS-t, a szérumot, a plazmát és a perifériás vér mononukleáris sejtjeit (PBMC) elválasztják a buffy coat-ból, és kivonják további tárolás és vizsgálatok céljából. A DNS-mintához a teljes vér 2,5 ml-ét egy PAX gén DNS-csőben tárolják a gyűjtés helyén, és a fő központba szállítják 4-10 C-on. A fő központban ezután át kell helyezni egy 2 ml-es kriocsőbe, és -70-80 °C-on kell tárolni. A páciens RNS-felvételéhez 2,5 ml teljes vért gyűjtenek a PAX gén RNS csőben, és a fő központba küldik 4-10 C-on, amelyet szintén áthelyeznek egy kriotube, ahol -70°-on tárolják. 80 C.

A páciens szérumát, plazmáját és a buffy coat-ot is begyűjtik. A megfelelő gyűjtési helyeken a szérumot szérumleválasztó csőben gyűjtik, majd 30 perces vénapunkció után centrifugálják és -20 C-on tárolják. A páciens plazmájához a sejtelőkészítő csövet a vérvételt követő 2 órán belül használják. Ezután minden minta készen áll a -20 C-on történő tárolásra, ha a mintákat humán szérum típusú antitesttel, DMSO-val és fagyasztóközeggel kezeljük. A PBMC elválasztásához és extrahálásához a fehér buffy coat réteget elválasztják, és 1,5 ml-es csőben tárolják fagyasztóközeggel -20 C-on. Az összegyűjtött alapadatok ezután tisztítási folyamaton mennek keresztül, és minőségük további értékelésére kerül sor. Ezenkívül öt beteget választanak ki, akik teljes genom szekvenálást végeznek. Az összes összegyűjtött biominta az NIH központ tárolójába kerül, és a továbbiakban egy multi-omikai vizsgálatokhoz használják fel a páciens mintáinak mély fenotípusának meghatározására.

Betegkövetés Minden beteget évente kétszer vagy többször követnek nyomon, várhatóan 80%-os követési arány. A második és harmadik évben a betegnyilvántartás és az adatgyűjtés ugyanazzal a protokollal folytatódik. Az összegyűjtött adatok hitelességének megőrzése érdekében az irányítóbizottság folyamatosan figyelemmel kíséri és auditálja az összegyűjtött adatokat. A jegyzőkönyv az előző évi adatok kiértékelése után tovább alakítható. Ezen túlmenően hatékony adatkezelési stratégiákat dolgoznak ki, beleértve a páciens testmérésének és vérmintájának szabványosítására vonatkozó iránymutatást. Tíz betegmintát választunk ki a következő generációs szekvenáláshoz, és felhasználjuk az új genetikai mutációk felfedezésére.

Genetikai mutációk elemzése három származású HPAH-betegeknél A HPAH-ban szenvedő betegek meghatározása érdekében családi genetikai vizsgálatot végeznek. Minden BMPR2, ACVRL1, ENG, CAV1, SMAD1, SMAD4, SMAD9, KCNK3 és/vagy EIF2AK4 mutációval rendelkező PAH-beteg háromgenerációs törzskönyvét értékelik. A HPAH-ban szenvedő betegek családtagjaitól vérmintákat vesznek genetikai szűréshez.