A Plataforma PAH para Fenotipagem Profunda em Assuntos Coreanos (PHOENIKS)

Objetivos do estudo O presente estudo é um registro multicêntrico e biobanco baseado em populações sul-coreanas para construir um banco de dados para a elucidação dos modificadores moleculares e genéticos da HAP. O objetivo final é utilizar dados fenotípicos profundos para previsão de prognóstico e descoberta de biomarcadores e terapias direcionadas.

Amostra do estudo O presente estudo inicialmente excluirá a forma mais frequente de HAP na Coréia, a HAP relacionada à doença do tecido conjuntivo (DTC), e focará no diagnóstico e fenotipagem profunda de pacientes com HAP idiopática (IPAH) e HAP hereditária (HPAH). Os critérios de inclusão são os seguintes: (1) maiores de 18 anos, (2) pressão arterial pulmonar média de 25mmHg ou superior confirmada por cateterismo cardíaco direito (CCR), (3) resistência vascular pulmonar ≥ 240 dines∙s∙cm- 5, (4) pressão diastólica do ventrículo esquerdo (LVDEP) ou pressão capilar pulmonar (PCWP) ≤ 15mmHg. Os critérios de exclusão são: (1) pacientes com HAP induzida por drogas, (2) DTC, infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV), hipertensão portal, doença cardíaca congênita ou HAP associada à esquistossomose, (3) respondedores de longo prazo ao cálcio bloqueadores de canais, (4) pacientes com HAP com características evidentes de envolvimento dos capilares venosos, deixando os pacientes com HAPI e HAH entre o grupo 1 de HP a ser avaliado. A HPAH será diagnosticada pela identificação de pacientes com variantes patogênicas heterozigóticas de genes predeterminados, como BMPR2, ACVRL1, ENG, CAV1, SMAD1, SMAD4, SMAD9, KCNK3 e EIF2AK4. Os pacientes sem uma mutação genética específica serão categorizados como pacientes com HAPI. Os dados genômicos dos membros da família em 3 pedigrees de um paciente HPAH também serão analisados. Todos os dados clínicos e biológicos serão relatados em um formulário personalizado de relatório de caso baseado na Web chamado sistema iCReaT gerenciado pelo Centro Coreano de Controle de Doenças. Todos os bioespécimes coletados serão armazenados no armazenamento principal do Instituto Nacional de Saúde da Coreia. Embora a análise atual esteja planejada para ser limitada a pacientes com HAPI e HPAH, nosso comitê diretor planeja expandir para todos os tipos de HAP em estudos subsequentes. Este estudo foi aprovado pelo comitê de ética institucional de cada instituição participante e atendeu à Declaração de Helsinque (6ª revisão). Um consentimento informado será recebido por cada paciente.

Dados de linha de base e coleta de amostras biológicas Os dados de linha de base dos pacientes registrados nos 16 hospitais regionais incluirão o seguinte: classificação funcional da OMS, teste de caminhada de 6 minutos, amostra de sangue, eletrocardiograma, radiografia de tórax, ecocardiografia, teste cardiopulmonar opcional , ressonância magnética cardíaca opcional e RHC. Informações detalhadas de cada exame são especificadas na Tabela 2. O paciente registrado será acompanhado regularmente para mais dados e coleta de amostras biológicas.

Com a amostra de sangue do paciente, DNA, RNA, soro, plasma e células mononucleares do sangue periférico (PBMC) da camada leucocitária serão separados e extraídos para posterior armazenamento e estudos. Para a amostra de DNA, 2,5ml de sangue total serão armazenados em um tubo de DNA do gene PAX no local de coleta, e serão levados para o centro principal a 4~10 C. No centro principal, então, ser transferido para um criotubo de 2ml para ser armazenado a -70~80C. Para a coleta de RNA do paciente, 2,5 mL de sangue total serão coletados no tubo de RNA do gene PAX, e serão enviados para o centro principal a 4~10 C, que também será transferido para um criotubo para ser armazenado a -70~ 80C.

Soro, plasma e buffy coat do paciente também serão coletados. Nos respectivos locais de coleta, o soro será coletado em um tubo de separação de soro e, após 30 minutos de punção venosa, será centrifugado e armazenado a -20C. Para o plasma do paciente, o tubo de preparação de células será usado dentro de 2 horas após a coleta de sangue. Em seguida, cada amostra estará pronta para ser armazenada a -20C, tratando as amostras com anticorpo do tipo soro humano, DMSO e meio de congelamento. Para separar e extrair PBMC, a camada de revestimento leucocitário branco será separada e armazenada em um tubo de 1,5 ml com meio de congelamento a -20C. Os dados de linha de base coletados passarão por um processo de limpeza e uma avaliação adicional de sua qualidade será feita. Além disso, cinco pacientes serão selecionados para fazer o sequenciamento de todo o genoma. Todo o bioespécime coletado será doado para o armazenamento do centro do NIH e será posteriormente usado para estudos multi-ômicos a fim de aprofundar o fenótipo dos espécimes do paciente.

Acompanhamento do paciente Todos os pacientes serão acompanhados duas vezes ou mais por ano, com taxa de acompanhamento esperada de 80%. Durante o segundo e terceiro ano, o registro de pacientes e a coleta de dados continuarão com o mesmo protocolo. Para manter a credibilidade dos dados coletados, o comitê gestor monitorará e auditará continuamente os dados coletados. O protocolo pode ser elaborado posteriormente após a avaliação dos dados do ano anterior. Além disso, serão desenvolvidas estratégias eficazes de gerenciamento de dados, incluindo uma diretriz para padronizar a medição corporal e a amostra de sangue do paciente. Dez amostras de pacientes serão selecionadas para um sequenciamento de próxima geração, e seremos utilizados na descoberta de novas mutações genéticas.

Análise de mutação genética em três heredogramas para pacientes com HPAH Para determinar os pacientes com HPAH, será realizado um estudo genético familiar. Será avaliado um heredograma de três gerações para cada paciente com HAP com ou sem a existência de uma mutação BMPR2, ACVRL1, ENG, CAV1, SMAD1, SMAD4, SMAD9, KCNK3 e/ou EIF2AK4. Amostras de sangue de familiares de pacientes com HPAH serão coletadas para triagem genética.