PAH-plattformen for dyp fenotyping i koreanske emner (PHOENIKS)

Studiemål Den nåværende studien er et multisenterregister og en biobank basert på sørkoreanske populasjoner for å konstruere en database for å belyse de molekylære og genetiske modifikatorene av PAH. Det endelige målet er å bruke dype fenotypiske data for prognoseprediksjon og oppdagelse av biomarkører og målrettede terapier.

Studieprøve Den nåværende studien vil i utgangspunktet utelukke den hyppigste formen for PAH i Korea, bindevevssykdom (CTD)-relatert PAH, og fokusere på diagnostisering og dyp fenotyping av pasienter med idiopatisk PAH (IPAH) og arvelig PAH (HPAH). Inklusjonskriteriene er som følger: (1) over 18 år, (2) gjennomsnittlig lungearterietrykk på 25 mmHg eller høyere bekreftet ved høyre hjertekateterisering (RHC), (3) pulmonal vaskulær motstand ≥ 240 dyn∙s∙cm- 5, (4) venstre ventrikkel diastolisk trykk (LVDEP) eller pulmonært kapillært kiletrykk (PCWP) ≤ 15 mmHg. Eksklusjonskriterier er: (1) pasienter med medikamentindusert PAH, (2) CTD, humant immunsviktvirus (HIV) infeksjon, portal hypertensjon, medfødt hjertesykdom eller Schistosomiasis-assosiert PAH, (3) langtidsrespondere på kalsium kanalblokkere, (4) PAH-pasienter med åpenbare trekk ved venøs kapillærinvolvering, som etterlater IPAH- og HPAH-pasienter blant gruppe 1 av PH for å bli evaluert. HPAH vil bli diagnostisert ved å identifisere pasienter med heterozygote patogene varianter av forhåndsbestemte gener som BMPR2, ACVRL1, ENG, CAV1, SMAD1, SMAD4, SMAD9, KCNK3 og EIF2AK4. Pasienter uten en spesifikk genetisk mutasjon vil da bli kategorisert som IPAH-pasienter. De genomiske dataene til familiemedlemmer på tvers av 3 stamtavler til en HPAH-pasient vil også bli analysert. Alle kliniske og biologiske data vil bli rapportert til et tilpasset nettbasert case-rapportskjema kalt iCReaT-systemet administrert av Korean Center for Disease Control. Alle innsamlede bioprøver vil bli lagret ved det koreanske nasjonale helseinstituttets hovedlager. Selv om den nåværende analysen er planlagt begrenset til IPAH- og HPAH-pasienter, planlegger vår styringskomité å utvide til alle typer PAH i påfølgende studier. Denne studien ble godkjent av den institusjonelle etiske komiteen til hver deltakende institusjon og fulgte Helsinki-erklæringen (6. revisjon). Et informert samtykke vil mottas av hver pasient.

Grunnlinjedata og innsamling av bioprøver Grunnlinjedataene fra de registrerte pasientene på tvers av de 16 regionale sykehusene vil inkludere følgende: WHO funksjonsklassifisering, 6-minutters gangtest, blodprøve, elektrokardiogram, røntgen thorax, ekkokardiografi, valgfri pulmonal-kardio treningstest , valgfri hjerte-MR og RHC. Detaljert informasjon om hver eksamen er spesifisert i tabell 2. Den registrerte pasienten vil bli fulgt opp med jevne mellomrom for ytterligere data og innsamling av bioprøver.

Med pasientens blodprøve vil DNA, RNA, serum, plasma og mononukleære celler fra perifert blod (PBMC) fra buffy coat bli separert og ekstrahert for videre lagring og studier. For DNA-prøven vil 2,5 ml av fullblodet lagres i et PAX-gen-DNA-rør på oppsamlingsstedet, og det vil bli fraktet til hovedsenteret ved 4~10 C. Ved hovedsenteret vil det da, overføres til et 2 ml kryorør for å lagres ved -70~80C. For pasientens RNA-innsamling vil 2,5 mL fullblod samles inn ved PAX-gen-RNA-røret, og det vil bli sendt til hovedsenteret ved 4~10 C, som også overføres videre til et kryorør som skal lagres ved -70~ 80C.

Pasientens serum, plasma og buffy coat vil også bli samlet inn. På de respektive oppsamlingsstedene vil serum samles ved et serumseparasjonsrør, og etter 30 minutter med venepunktur vil det sentrifugeres og lagres ved -20C. For pasientens plasma vil celleforberedelsesrør brukes innen 2 timer etter blodprøvetaking. Deretter vil hver prøve være klar til å lagres ved -20C ved å behandle prøvene med humant serumtype antistoff, DMSO og frysemedium. For å separere og trekke ut PBMC, vil det hvite buffy coat-laget separeres og lagres i et 1,5 ml rør med et frysemedium ved -20C. De innsamlede grunndataene vil deretter gå gjennom en oppryddingsprosess og ytterligere evaluering av kvaliteten vil bli gjort. I tillegg vil fem pasienter bli valgt ut til å gjøre en hel-genomsekvensering. Alle de innsamlede bioprøvene vil bli donert til NIH-senterlagring, og vil bli videre brukt til multiomics-studier for å dypere fenotyper av pasientens prøver.

Pasientoppfølging Alle pasienter vil bli fulgt opp to ganger eller mer i året, med forventet 80 % oppfølgingsrate. I løpet av andre og tredje år vil pasientregistrering og datainnsamling bli videreført med samme protokoll. For å opprettholde troverdigheten til innsamlede data, vil styringsgruppen kontinuerlig overvåke og revidere de innsamlede dataene. Protokoll kan utformes ytterligere etter evaluering av forrige års data. I tillegg vil det utvikles effektive datahåndteringsstrategier, inkludert en retningslinje for å standardisere pasientens kroppsmåling og blodprøve. Ti pasientprøver vil bli valgt ut for en neste generasjons sekvensering, og vi vil bli brukt til å oppdage nye genetiske mutasjoner.

Genetisk mutasjonsanalyse på tvers av tre stamtavler for HPAH-pasienter For å bestemme pasienter med HPAH, vil det bli utført en familiær genetisk studie. En tre-generasjons stamtavle for hver PAH-pasient med eller uten eksistensen av en BMPR2-, ACVRL1-, ENG-, CAV1-, SMAD1-, SMAD4-, SMAD9-, KCNK3- og/eller EIF2AK4-mutasjon vil bli evaluert. Blodprøver fra familiemedlemmer til pasienter med HPAH vil bli samlet inn for genetisk screening.