用于韩国受试者深度表型分析的 PAH 平台 (PHOENIKS)

研究目标 目前的研究是一个基于韩国人群的多中心登记和生物库，以构建一个数据库，用于阐明 PAH 的分子和遗传修饰因子。 最终目标是利用深层表型数据进行预后预测和发现生物标志物和靶向治疗。

研究样本 目前的研究将首先排除韩国最常见的 PAH 形式，即结缔组织病 (CTD) 相关的 PAH，并专注于特发性 PAH (IPAH) 和遗传性 PAH (HPAH) 患者的诊断和深度表型分析。 入选标准如下：（1）18岁以上，（2）经右心导管检查（RHC）证实平均肺动脉压≥25mmHg，（3）肺血管阻力≥240达因∙s∙cm- 5、（4）左心室舒张压（LVDEP）或肺毛细血管楔压（PCWP）≤15mmHg。 排除标准是：(1) 患有药物性 PAH 的患者，(2) CTD、人类免疫缺陷病毒 (HIV) 感染、门静脉高压症、先天性心脏病或血吸虫病相关的 PAH，(3) 对钙有长期反应者通道阻滞剂，(4) 具有明显的静脉毛细血管受累特征的 PAH 患者，将 IPAH 和 HPAH 患者留在要评估的 PH 组 1 中。 HPAH 将通过识别具有预定基因（如 BMPR2、ACVRL1、ENG、CAV1、SMAD1、SMAD4、SMAD9、KCNK3 和 EIF2AK4）的杂合致病性变异的患者来诊断。 没有特定基因突变的患者将被归类为 IPAH 患者。 还将分析 HPAH 患者 3 个家系的家庭成员的基因组数据。 所有临床和生物学数据都将报告到一个定制的基于网络的病例报告表，称为 iCReaT 系统，由韩国疾病控制中心管理。 所有收集到的生物样本都将储存在韩国国立卫生研究院的主仓库中。 虽然目前的分析计划仅限于 IPAH 和 HPAH 患者，但我们的指导委员会计划在后续研究中扩展到所有类型的 PAH。 本研究经各参与机构的机构伦理委员会批准，符合赫尔辛基宣言（第六次修订）。 每位患者都将收到知情同意书。

基线数据和生物样本采集 16 家地区医院登记患者的基线数据将包括以下内容：WHO 功能分类、6 分钟步行试验、血样、心电图、胸片、超声心动图、可选的肺心运动试验、可选的心脏 MRI 和 RHC。 每个检查的详细信息在表 2 中指定。 将定期对注册患者进行随访，以获取进一步的数据和生物样本收集。

通过患者的血液样本，血沉棕黄层中的 DNA、RNA、血清、血浆和外周血单核细胞 (PBMC) 将被分离并提取，以供进一步储存和研究。 对于DNA样本，2.5ml的全血会在采集点保存在PAX基因DNA管中，在4~10℃的温度下被运送到主中心。在主中心，然后，转移至2ml冻存管中-70~80℃保存。 采集患者RNA，在PAX基因RNA管中采集2.5mL全血，4~10℃送至主中心，再转入冻存管-70℃保存。 80摄氏度。

还将收集患者的血清、血浆和血沉棕黄层。 在各采集点，将血清采集到血清分离管中，静脉穿刺30分钟后，离心-20℃保存。 对于患者的血浆，细胞制备管将在采血后 2 小时内使用。 然后，通过用人血清型抗体、DMSO 和冷冻介质处理样品，每个样品将准备好在 -20 C 下储存。 为了分离和提取 PBMC，白色血沉棕黄层将被分离并储存在 1.5ml 试管中，冷冻介质在 -20C。 收集到的基线数据将经过清理过程，并对其质量进行进一步评估。 此外，还将选择五名患者进行全基因组测序。 所有收集到的生物标本将捐赠给NIH中心存储，并将进一步用于多组学研究，以对患者标本进行深度表型分析。

患者随访 所有患者每年将接受两次或更多次随访，预计随访率为 80%。 在第二年和第三年，患者登记和数据收集将按照相同的协议继续进行。 为了保持所收集数据的可信度，指导委员会将持续监控和审核所收集的数据。 在评估前一年的数据后，可能会进一步制定协议。 此外，还将制定有效的数据管理策略，包括标准化患者身体测量和血液样本的指南。 将选择十个患者样本进行下一代测序，我们将用于发现新的基因突变。

HPAH 患者的三个系谱的基因突变分析 为了确定 HPAH 患者，将进行家族遗传研究。 将评估每个 PAH 患者的三代谱系，无论是否存在 BMPR2、ACVRL1、ENG、CAV1、SMAD1、SMAD4、SMAD9、KCNK3 和/或 EIF2AK4 突变。 将采集 HPAH 患者家庭成员的血样进行基因筛查。