PAH-platformen for dyb fænotyping i koreanske emner (PHOENIKS)

Undersøgelsens mål Den aktuelle undersøgelse er et multicenterregister og en biobank baseret på sydkoreanske befolkninger for at konstruere en database til belysning af PAH's molekylære og genetiske modifikatorer. Det ultimative mål er at bruge dybe fænotypiske data til prognose forudsigelse og opdagelse af biomarkører og målrettede terapier.

Studieprøve Den nuværende undersøgelse vil i første omgang udelukke den hyppigste form for PAH i Korea, den bindevævssygdomsrelaterede PAH (CTD), og fokusere på diagnosticering og dyb fænotyping af patienter med idiopatisk PAH (IPAH) og arvelig PAH (HPAH). Inklusionskriterierne er som følger: (1) over 18 år, (2) gennemsnitligt pulmonalt arterielt tryk på 25 mmHg eller højere bekræftet ved højre hjertekateterisering (RHC), (3) pulmonal vaskulær modstand ≥ 240 dyn∙s∙cm- 5, (4) venstre ventrikel diastolisk tryk (LVDEP) eller pulmonært kapillært kiletryk (PCWP) ≤ 15 mmHg. Eksklusionskriterier er: (1) patienter med lægemiddel-induceret PAH, (2) CTD, human immundefektvirus (HIV) infektion, portal hypertension, medfødt hjertesygdom eller skistosomiasis-associeret PAH, (3) langsigtede respondere på calcium kanalblokkere, (4) PAH-patienter med åbenlyse træk ved venøse kapillærer, hvilket efterlader IPAH- og HPAH-patienter blandt gruppe 1 af PH, der skal evalueres. HPAH vil blive diagnosticeret ved at identificere patienter med heterozygote patogene varianter af forudbestemte gener såsom BMPR2, ACVRL1, ENG, CAV1, SMAD1, SMAD4, SMAD9, KCNK3 og EIF2AK4. Patienter uden en specifik genetisk mutation vil herefter blive kategoriseret som IPAH-patienter. De genomiske data fra familiemedlemmer på tværs af 3 stamtavler fra en HPAH-patient vil også blive analyseret. Alle kliniske og biologiske data vil blive rapporteret til en tilpasset webbaseret case-rapportformular kaldet iCReaT-systemet, der administreres af det koreanske center for sygdomskontrol. Alle indsamlede bioprøver vil blive opbevaret på Koreas National Institute of Healths hovedlager. Selvom den nuværende analyse er planlagt begrænset til IPAH- og HPAH-patienter, planlægger vores styregruppe at udvide til alle typer PAH i efterfølgende undersøgelser. Denne undersøgelse blev godkendt af den institutionelle etiske komité for hver deltagende institution og var i overensstemmelse med Helsinki-erklæringen (6. revision). Hver patient modtager et informeret samtykke.

Baselinedata og indsamling af bioprøver Baselinedata fra de registrerede patienter på tværs af de 16 regionale hospitaler vil omfatte følgende: WHO funktionsklassifikation, 6-minutters gangtest, blodprøve, elektrokardiogram, røntgen af ​​thorax, ekkokardiografi, valgfri pulmonal-cardio træningstest , valgfri hjerte-MRI og RHC. Detaljerede oplysninger om hver eksamen er specificeret i tabel 2. Den registrerede patient vil blive fulgt op på en regelmæssig basis for yderligere data og bioprøveindsamling.

Med patientens blodprøve vil DNA, RNA, serum, plasma og mononukleære celler fra perifert blod (PBMC) fra buffy coaten blive adskilt og ekstraheret til yderligere opbevaring og undersøgelser. Til DNA-prøven vil 2,5 ml af fuldblodet blive opbevaret i et PAX-gen DNA-rør på opsamlingsstedet, og det vil blive båret til hovedcentret ved 4~10 C. Ved hovedcentret vil det derefter, overføres til et 2 ml kryorør, der skal opbevares ved -70~80C. Til patientens RNA-opsamling vil 2,5 ml fuldblod blive opsamlet ved PAX-gen-RNA-røret, og det vil blive sendt til hovedcentret ved 4~10 C, som også overføres yderligere til et kryorør, der skal opbevares ved -70~ 80C.

Patientens serum, plasma og buffy coat vil også blive indsamlet. På de respektive opsamlingssteder vil serum blive opsamlet i et serumseparationsglas, og efter 30 minutters venepunktur vil det blive centrifugeret og opbevaret ved -20C. Til patientens plasma vil celleforberedelsesrør blive brugt inden for 2 timer efter blodopsamling. Derefter vil hver prøve være klar til at blive opbevaret ved -20C ved at behandle prøverne med humant serumtype antistof, DMSO og frysemedium. For at adskille og ekstrahere PBMC adskilles det hvide buffy coat-lag og opbevares i et 1,5 ml rør med et frysemedium ved -20C. De indsamlede basisdata vil derefter gennemgå en oprydningsproces, og der vil blive foretaget yderligere evaluering af deres kvalitet. Derudover vil fem patienter blive udvalgt til at foretage en hel-genom-sekventering. Alle de indsamlede bioprøver vil blive doneret til NIH-centeropbevaring og vil blive yderligere brugt til multi-omics undersøgelser med henblik på at dybe fænotyper af patientens prøver.

Patientopfølgning Alle patienter vil blive fulgt op to gange eller mere om året med en forventet opfølgningsrate på 80 %. I løbet af andet og tredje år vil patientregistrering og dataindsamling blive videreført med samme protokol. For at bevare de indsamlede datas troværdighed vil styregruppen løbende overvåge og revidere de indsamlede data. Protokol kan udformes yderligere efter evaluering af det foregående års data. Derudover vil der blive udviklet effektive datahåndteringsstrategier, herunder en retningslinje til standardisering af patientens kropsmåling og blodprøve. Ti patientprøver vil blive udvalgt til en næste generations sekventering, og vi vil blive brugt til at opdage nye genetiske mutationer.

Genetisk mutationsanalyse på tværs af tre stamtavler for HPAH-patienter For at bestemme patienter med HPAH vil der blive udført en familiær genetisk undersøgelse. En tre-generations stamtavle for hver PAH-patient med eller uden eksistensen af ​​en BMPR2-, ACVRL1-, ENG-, CAV1-, SMAD1-, SMAD4-, SMAD9-, KCNK3- og/eller EIF2AK4-mutation vil blive evalueret. Blodprøver fra familiemedlemmer til patienter med en HPAH vil blive indsamlet til genetisk screening.