La piattaforma PAH per la fenotipizzazione profonda nei soggetti coreani (PHOENIKS)

Obiettivi dello studio L'attuale studio è un registro multicentrico e una biobanca basati su popolazioni sudcoreane per costruire un database per la delucidazione dei modificatori molecolari e genetici della PAH. L'obiettivo finale è utilizzare dati fenotipici profondi per la previsione della prognosi e la scoperta di biomarcatori e terapie mirate.

Campione di studio L'attuale studio escluderà inizialmente la forma più frequente di PAH in Corea, la PAH correlata alla malattia del tessuto connettivo (CTD), e si concentrerà sulla diagnosi e sulla fenotipizzazione profonda dei pazienti con PAH idiopatica (IPAH) e PAH ereditaria (HPAH). I criteri di inclusione sono i seguenti: (1) età superiore a 18 anni, (2) pressione arteriosa polmonare media di 25 mmHg o superiore confermata dal cateterismo del cuore destro (RHC), (3) resistenza vascolare polmonare ≥ 240 dynes∙s∙cm- 5, (4) pressione diastolica del ventricolo sinistro (LVDEP) o pressione di incuneamento capillare polmonare (PCWP) ≤ 15 mmHg. I criteri di esclusione sono: (1) pazienti con PAH indotta da farmaci, (2) CTD, infezione da virus dell'immunodeficienza umana (HIV), ipertensione portale, cardiopatia congenita o PAH associata alla schistosomiasi, (3) responder a lungo termine al calcio bloccanti dei canali, (4) pazienti con PAH con caratteristiche evidenti di coinvolgimento dei capillari venosi, lasciando i pazienti con IPAH e HPAH nel gruppo 1 di IP da valutare. HPAH sarà diagnosticata identificando i pazienti con varianti patogene eterozigoti di geni predeterminati come BMPR2, ACVRL1, ENG, CAV1, SMAD1, SMAD4, SMAD9, KCNK3 e EIF2AK4. I pazienti senza una specifica mutazione genetica saranno quindi classificati come pazienti IPAH. Verranno inoltre analizzati i dati genomici dei membri della famiglia in 3 pedigree di un paziente HPAH. Tutti i dati clinici e biologici verranno riportati a un modulo di segnalazione del caso basato sul Web personalizzato chiamato sistema iCReaT gestito dal Centro coreano per il controllo delle malattie. Tutti i campioni biologici raccolti saranno conservati presso il deposito principale dell'Istituto Nazionale di Salute coreano. Sebbene l'attuale analisi sia pianificata per essere limitata ai pazienti con IPAH e HPAH, il nostro comitato direttivo prevede di espandersi a tutti i tipi di PAH negli studi successivi. Questo studio è stato approvato dal comitato etico istituzionale di ciascuna istituzione partecipante ed è conforme alla Dichiarazione di Helsinki (6a revisione). Un consenso informato sarà ricevuto da ogni paziente.

Dati di base e raccolta di campioni biologici I dati di base dei pazienti registrati nei 16 ospedali regionali includeranno quanto segue: classificazione funzionale dell'OMS, test del cammino in 6 minuti, campione di sangue, elettrocardiogramma, radiografia del torace, ecocardiografia, test da sforzo cardiopolmonare opzionale , risonanza magnetica cardiaca opzionale e RHC. Le informazioni dettagliate di ciascun esame sono specificate nella Tabella 2. Il paziente registrato sarà seguito regolarmente per ulteriori dati e raccolta di campioni biologici.

Con il campione di sangue del paziente, il DNA, l'RNA, il siero, il plasma e le cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) dal buffy coat saranno separati ed estratti per ulteriore conservazione e studi. Per il campione di DNA, 2,5 ml di sangue intero saranno conservati in una provetta di DNA del gene PAX nel sito di raccolta e saranno portati al centro principale a 4~10 C. Al centro principale, quindi, essere trasferito in un criotubo da 2 ml da conservare a -70~80°C. Per la raccolta dell'RNA del paziente, verranno raccolti 2,5 mL di sangue intero nella provetta dell'RNA del gene PAX e inviato al centro principale a 4~10 C, che verrà ulteriormente trasferito in un criotubo per essere conservato a -70~ 80°C.

Saranno raccolti anche il siero, il plasma e il buffy coat del paziente. Nei rispettivi siti di raccolta, il siero sarà raccolto in una provetta per la separazione del siero e, dopo 30 minuti di prelievo venoso, sarà centrifugato e conservato a -20°C. Per il plasma del paziente, la provetta per la preparazione delle cellule verrà utilizzata entro 2 ore dalla raccolta del sangue. Quindi, ogni campione sarà pronto per essere conservato a -20C trattando i campioni con anticorpo di tipo siero umano, DMSO e mezzo di congelamento. Per separare ed estrarre PBMC, lo strato di buffy coat bianco verrà separato e conservato in una provetta da 1,5 ml con un mezzo di congelamento a -20°C. I dati di riferimento raccolti passeranno quindi attraverso un processo di pulizia e verrà effettuata un'ulteriore valutazione della loro qualità. Inoltre, verranno selezionati cinque pazienti per eseguire un sequenziamento dell'intero genoma. Tutti i campioni biologici raccolti saranno donati alla conservazione del centro NIH e saranno ulteriormente utilizzati per studi multi-omici al fine di fenotipizzare in profondità i campioni del paziente.

Follow-up dei pazienti Tutti i pazienti saranno seguiti due o più volte all'anno, con un tasso di follow-up previsto dell'80%. Durante il secondo e il terzo anno, il registro dei pazienti e la raccolta dei dati continueranno con lo stesso protocollo. Per mantenere la credibilità dei dati raccolti, il comitato direttivo monitorerà e verificherà continuamente i dati raccolti. Il protocollo può essere ulteriormente elaborato dopo aver valutato i dati dell'anno precedente. Inoltre, saranno sviluppate efficaci strategie di gestione dei dati, tra cui una linea guida per standardizzare la misurazione del corpo del paziente e il campione di sangue. Dieci campioni di pazienti saranno selezionati per un sequenziamento di nuova generazione e saremo utilizzati per scoprire nuove mutazioni genetiche.

Analisi delle mutazioni genetiche su tre pedigree per pazienti con HPAH Al fine di determinare i pazienti con HPAH, verrà eseguito uno studio genetico familiare. Verrà valutato un pedigree di tre generazioni per ciascun paziente con PAH con o senza l'esistenza di una mutazione BMPR2, ACVRL1, ENG, CAV1, SMAD1, SMAD4, SMAD9, KCNK3 e/o EIF2AK4. Saranno raccolti campioni di sangue da familiari di pazienti con HPAH per lo screening genetico.