PAH-alusta syvälle fenotyyppisyydelle korealaisissa aiheissa (PHOENIKS)

Tutkimuksen tavoitteet Tämä tutkimus on Etelä-Korean populaatioihin perustuva monikeskusrekisteri ja biopankki, jonka tarkoituksena on rakentaa tietokanta PAH:n molekyyli- ja geneettisten muuntajien selvittämiseksi. Lopullisena tavoitteena on hyödyntää syvää fenotyyppidataa ennusteen ennustamiseen ja biomarkkerien ja kohdennettujen hoitojen löytämiseen.

Tutkimusnäyte Tässä tutkimuksessa suljetaan aluksi pois Koreassa yleisin PAH-muoto, sidekudossairauteen (CTD) liittyvä PAH, ja siinä keskitytään idiopaattisten PAH- (IPAH) ja perinnöllisten PAH-potilaiden (HPAH) diagnosointiin ja syväfenotyypitykseen. Osallistumiskriteerit ovat seuraavat: (1) yli 18-vuotiaat, (2) keskimääräinen keuhkovaltimopaine 25 mmHg tai korkeampi, joka on vahvistettu oikean sydämen katetroinnilla (RHC), (3) keuhkoverisuonivastus ≥ 240 dynes∙s∙cm- 5, (4) vasemman kammion diastolinen paine (LVDEP) tai keuhkokapillaarin kiilapaine (PCWP) ≤ 15 mmHg. Poissulkemiskriteerit ovat: (1) potilaat, joilla on lääkkeiden aiheuttama PAH, (2) CTD, ihmisen immuunikatovirus (HIV) -infektio, portaalihypertensio, synnynnäinen sydänsairaus tai skitosomiaasiin liittyvä PAH, (3) kalsiumille pitkäaikaiset vasteet. kanavasalpaajat, (4) PAH-potilaat, joilla on ilmeisiä laskimokapillaarien osallistumista, jättäen IPAH- ja HPAH-potilaat PH-ryhmään 1 arvioitavana. HPAH diagnosoidaan tunnistamalla potilaat, joilla on ennalta määrättyjen geenien, kuten BMPR2, ACVRL1, ENG, CAV1, SMAD1, SMAD4, SMAD9, KCNK3 ja EIF2AK4, heterotsygoottiset patogeeniset variantit. Potilaat, joilla ei ole spesifistä geneettistä mutaatiota, luokitellaan sitten IPAH-potilaiksi. Myös perheenjäsenten genomitiedot HPAH-potilaan kolmen sukutaulun ajalta analysoidaan. Kaikki kliiniset ja biologiset tiedot raportoidaan räätälöityyn verkkopohjaiseen tapausraporttilomakkeeseen, jota kutsutaan iCReaT-järjestelmäksi, jota hallinnoi Korean tautientorjuntakeskus. Kaikki kerätyt bionäytteet säilytetään Korean National Institute of Healthin päävarastossa. Vaikka nykyinen analyysi on suunniteltu rajoittuvan IPAH- ja HPAH-potilaisiin, ohjauskomiteamme aikoo laajentaa myöhemmissä tutkimuksissa kaikkiin PAH-tyyppeihin. Tämän tutkimuksen hyväksyivät kunkin osallistuvan laitoksen institutionaaliset eettiset komiteat ja se vastasi Helsingin julistusta (6. versio). Jokainen potilas saa tietoisen suostumuksen.

Perustiedot ja bionäytteiden kerääminen Perustiedot rekisteröidyistä potilaista 16 aluesairaalassa sisältävät seuraavat: WHO:n toimintaluokitus, 6 minuutin kävelytesti, verinäyte, EKG, rintakehän röntgenkuvaus, kaikukardiografia, valinnainen keuhko-kardiotesti , valinnainen sydämen MRI ja RHC. Yksityiskohtaiset tiedot kustakin kokeesta on esitetty taulukossa 2. Rekisteröityä potilasta seurataan säännöllisesti lisätietojen ja bionäytteiden keräämiseksi.

Potilaan verinäytteen avulla DNA, RNA, seerumi, plasma ja perifeerisen veren mononukleaariset solut (PBMC) erotetaan buffy coatista ja uutetaan myöhempää säilytystä ja tutkimuksia varten. DNA-näytettä varten 2,5 ml kokoverta varastoidaan PAX-geenin DNA-putkeen keräyskohdassa ja se kuljetetaan pääkeskukseen 4-10 C:ssa. Pääkeskuksessa se sitten siirretään 2 ml:n kryoputkeen säilytettäväksi -70-80 C:ssa. Potilaan RNA-keräystä varten PAX-geenin RNA-putkeen kerätään 2,5 ml kokoverta, joka lähetetään pääkeskukseen 4-10 C:ssa, joka myös siirretään edelleen kryoputkeen säilytettäväksi -70°:ssa. 80C.

Myös potilaan seerumi, plasma ja buffy coat kerätään. Vastaavissa keräyspisteissä seerumi kerätään seerumin erotusputkeen, ja 30 minuutin laskimopunktion jälkeen se sentrifugoidaan ja säilytetään -20 C:ssa. Potilaan plasmaa varten solujen valmistusletkua käytetään 2 tunnin sisällä veren ottamisesta. Sitten jokainen näyte on valmis varastoitavaksi -20 °C:ssa käsittelemällä näytteet ihmisen seerumityypin vasta-aineella, DMSO:lla ja pakastusväliaineella. PBMC:n erottamiseksi ja uuttamiseksi valkoinen buffy coat -kerros erotetaan ja säilytetään 1,5 ml:n putkessa, jossa on pakastusväliaine -20 °C:ssa. Kerätyt perustiedot käyvät sitten puhdistusprosessin läpi, ja niiden laadusta tehdään lisäarviointi. Lisäksi valitaan viisi potilasta suorittamaan koko genomin sekvensointi. Kaikki kerätyt bionäytteet lahjoitetaan NIH-keskuksen varastoon, ja niitä käytetään edelleen multi-omiikkatutkimuksiin potilaan näytteiden syväfenotyypin määrittämiseksi.

Potilaan seuranta Kaikkia potilaita seurataan kahdesti tai useammin vuodessa, ja odotettavissa oleva seurantaprosentti on 80 %. Toisena ja kolmantena vuonna potilasrekisteriä ja tiedonkeruuta jatketaan samalla protokollalla. Kerätyn tiedon uskottavuuden ylläpitämiseksi ohjausryhmä seuraa ja auditoi kerättyä tietoa jatkuvasti. Pöytäkirjaa voidaan muokata edelleen edellisen vuoden tietojen arvioinnin jälkeen. Lisäksi kehitetään tehokkaita tiedonhallintastrategioita, mukaan lukien ohje potilaan kehon mittauksen ja verinäytteen standardoimiseksi. Kymmenen potilasnäytettä valitaan seuraavan sukupolven sekvensointiin, ja meitä hyödynnetään uusien geneettisten mutaatioiden löytämisessä.

HPAH-potilaiden kolmen sukujuuren geneettinen mutaatioanalyysi HPAH-potilaiden määrittämiseksi suoritetaan familiaalinen geneettinen tutkimus. Kolmen sukupolven sukutaulu jokaiselle PAH-potilaalle, jolla on BMPR2-, ACVRL1-, ENG-, CAV1-, SMAD1-, SMAD4-, SMAD9-, KCNK3- ja/tai EIF2AK4-mutaatio tai ei, arvioidaan. Verinäytteitä HPAH-potilaiden perheenjäseniltä kerätään geneettistä seulontaa varten.