Het PAH-platform voor diepe fenotypering bij Koreaanse proefpersonen (PHOENIKS)

Studiedoelstellingen De huidige studie is een multicenter register en biobank op basis van Zuid-Koreaanse populaties om een ​​database op te bouwen voor het ophelderen van de moleculaire en genetische modificatoren van PAH. Het uiteindelijke doel is om diepe fenotypische gegevens te gebruiken voor prognosevoorspelling en ontdekking van biomarkers en gerichte therapieën.

Onderzoekssteekproef Het huidige onderzoek zal in eerste instantie de meest voorkomende vorm van PAH in Korea, de aan bindweefselziekte (CTD) gerelateerde PAH, uitsluiten en zich richten op de diagnose en diepe fenotypering van patiënten met idiopathische PAH (IPAH) en erfelijke PAH (HPAH). De opnamecriteria zijn als volgt: (1) ouder dan 18 jaar, (2) gemiddelde pulmonale arteriële druk van 25 mmHg of hoger bevestigd door rechterhartkatheterisatie (RHC), (3) pulmonale vasculaire weerstand ≥ 240 dyne∙s∙cm- 5, (4) linker ventrikel diastolische druk (LVDEP) of pulmonale capillaire wigdruk (PCWP) ≤ 15 mmHg. Uitsluitingscriteria zijn: (1) patiënten met door geneesmiddelen geïnduceerde PAH, (2) CTD, infectie met het humaan immunodeficiëntievirus (HIV), portale hypertensie, congenitale hartziekte of met schistosomiasis geassocieerde PAH, (3) langdurige responders op calcium kanaalblokkers, (4) PAH-patiënten met duidelijke kenmerken van betrokkenheid van veneuze capillairen, waardoor IPAH- en HPAH-patiënten in groep 1 van PH te evalueren zijn. HPAH zal worden gediagnosticeerd door patiënten te identificeren met heterozygote pathogene varianten van vooraf bepaalde genen zoals BMPR2, ACVRL1, ENG, CAV1, SMAD1, SMAD4, SMAD9, KCNK3 en EIF2AK4. Patiënten zonder een specifieke genetische mutatie worden dan gecategoriseerd als IPAH-patiënten. De genomische gegevens van familieleden over 3 stambomen van een HPAH-patiënt zullen ook worden geanalyseerd. Alle klinische en biologische gegevens worden gerapporteerd via een op maat gemaakt webgebaseerd casusrapportformulier, het iCreaT-systeem genaamd, dat wordt beheerd door het Koreaanse Centrum voor ziektebestrijding. Alle verzamelde biospecimens zullen worden opgeslagen in de hoofdopslag van het Koreaanse National Institute of Health. Hoewel het de bedoeling is dat de huidige analyse zich beperkt tot IPAH- en HPAH-patiënten, is onze stuurgroep van plan om in volgende studies uit te breiden naar alle soorten PAH. Deze studie werd goedgekeurd door de institutionele ethische commissie van elke deelnemende instelling en voldeed aan de Verklaring van Helsinki (6e herziening). Elke patiënt ontvangt een geïnformeerde toestemming.

Baseline-gegevens en verzameling biospecimens De baseline-gegevens van de geregistreerde patiënten in de 16 regionale ziekenhuizen omvatten het volgende: WHO-functionele classificatie, 6-minuten wandeltest, bloedmonster, elektrocardiogram, thoraxfoto, echocardiografie, optionele long-cardio-inspanningstest , optionele Cardiale MRI en RHC. Gedetailleerde informatie over elk onderzoek wordt gespecificeerd in tabel 2. De geregistreerde patiënt zal regelmatig worden opgevolgd voor verdere gegevens en biospecimenverzameling.

Met het bloedmonster van de patiënt worden DNA, RNA, serum, plasma en perifere mononucleaire bloedcellen (PBMC) van de buffy coat gescheiden en geëxtraheerd voor verdere opslag en onderzoek. Voor het DNA-monster wordt 2,5 ml van het volbloed opgeslagen in een PAX-gen-DNA-buis op de verzamelplaats en het wordt naar het hoofdcentrum vervoerd bij 4 ~ 10 C. In het hoofdcentrum zal het dan worden overgebracht naar een cryobuis van 2 ml om te worden bewaard bij -70~80C. Voor de RNA-verzameling van de patiënt wordt 2,5 ml volbloed verzameld in de PAX-gen-RNA-buis en het wordt naar het hoofdcentrum gestuurd bij 4 ~ 10 C, dat ook verder zal worden overgebracht naar een cryobuis om te worden opgeslagen bij -70 ~ 80C.

Het serum, het plasma en de buffy coat van de patiënt worden ook verzameld. Op de respectieve verzamelplaatsen wordt serum verzameld in een serumscheidingsbuis en na 30 minuten venapunctie wordt het gecentrifugeerd en bewaard bij -20C. Voor het plasma van de patiënt wordt binnen 2 uur na bloedafname een buis voor celvoorbereiding gebruikt. Vervolgens is elk monster klaar om te worden bewaard bij -20 ° C door de monsters te behandelen met antilichaam van het menselijke serumtype, DMSO en vriesmedium. Om PBMC te scheiden en te extraheren, wordt de witte buffy coat-laag gescheiden en opgeslagen in een buis van 1,5 ml met een vriesmedium bij -20°C. De verzamelde basisgegevens gaan vervolgens door een opschoonproces en er zal een verdere evaluatie van de kwaliteit worden uitgevoerd. Daarnaast zullen vijf patiënten worden geselecteerd om een ​​volledige genoomsequencing uit te voeren. Alle verzamelde biospecimen zullen worden gedoneerd aan de opslag van het NIH-centrum en zullen verder worden gebruikt voor multi-omics-onderzoeken om de specimens van de patiënt diep te fenotyperen.

Patiënt Follow-up Alle patiënten zullen twee of meer keer per jaar worden opgevolgd, met een verwacht follow-uppercentage van 80%. Gedurende het tweede en derde jaar wordt de patiëntenregistratie en gegevensverzameling volgens hetzelfde protocol voortgezet. Om de geloofwaardigheid van de verzamelde gegevens te behouden, zal de stuurgroep de verzamelde gegevens continu monitoren en auditen. Het protocol kan verder worden uitgewerkt na evaluatie van de gegevens van het voorgaande jaar. Daarnaast zullen effectieve strategieën voor gegevensbeheer worden ontwikkeld, waaronder een richtlijn om de lichaamsafmetingen en het bloedmonster van de patiënt te standaardiseren. Er zullen tien patiëntmonsters worden geselecteerd voor sequencing van de volgende generatie, en we zullen worden gebruikt bij het ontdekken van nieuwe genetische mutaties.

Genetische mutatieanalyse over drie stambomen voor HPAH-patiënten Om patiënten met HPAH te bepalen, zal een familiale genetische studie worden uitgevoerd. Een stamboom van drie generaties voor elke PAH-patiënt met of zonder het bestaan ​​van een BMPR2-, ACVRL1-, ENG-, CAV1-, SMAD1-, SMAD4-, SMAD9-, KCNK3- en/of EIF2AK4-mutatie zal worden geëvalueerd. Bloedmonsters van familieleden van patiënten met een HPAH worden afgenomen voor genetische screening.