La plateforme PAH pour le phénotypage profond chez les sujets coréens (PHOENIKS)

Objectifs de l'étude L'étude actuelle est un registre multicentrique et une biobanque basée sur les populations sud-coréennes pour construire une base de données pour l'élucidation des modificateurs moléculaires et génétiques des HAP. L'objectif ultime est d'utiliser des données phénotypiques approfondies pour la prédiction du pronostic et la découverte de biomarqueurs et de thérapies ciblées.

Échantillon d'étude L'étude actuelle exclura initialement la forme la plus fréquente d'HTAP en Corée, l'HTAP liée à la maladie du tissu conjonctif (CTD), et se concentrera sur le diagnostic et le phénotypage profond des patients atteints d'HTAP idiopathique (IPAH) et d'HTAP héréditaire (HPAH). Les critères d'inclusion sont les suivants : (1) être âgé de plus de 18 ans, (2) pression artérielle pulmonaire moyenne de 25 mmHg ou plus confirmée par cathétérisme cardiaque droit (RHC), (3) résistance vasculaire pulmonaire ≥ 240 dynes∙s∙cm- 5, (4) pression diastolique du ventricule gauche (LVDEP) ou pression capillaire pulmonaire (PCWP) ≤ 15 mmHg. Les critères d'exclusion sont : (1) patients atteints d'HTAP d'origine médicamenteuse, (2) CTD, infection par le virus de l'immunodéficience humaine (VIH), hypertension portale, cardiopathie congénitale ou HTAP associée à la schistosomiase, (3) répondeurs à long terme au calcium bloquants de canaux, (4) patients atteints d'HTAP présentant des caractéristiques manifestes d'atteinte des capillaires veineux, laissant les patients IPAH et HPAH parmi le groupe 1 d'HTP à évaluer. L'HPAH sera diagnostiquée en identifiant les patients présentant des variantes pathogènes hétérozygotes de gènes prédéterminés tels que BMPR2, ACVRL1, ENG, CAV1, SMAD1, SMAD4, SMAD9, KCNK3 et EIF2AK4. Les patients sans mutation génétique spécifique seront alors classés comme patients IPAH. Les données génomiques des membres de la famille à travers 3 pedigrees d'un patient HPAH seront également analysées. Toutes les données cliniques et biologiques seront signalées à un formulaire de rapport de cas personnalisé en ligne appelé le système iCReaT géré par le Centre coréen de contrôle des maladies. Tous les échantillons biologiques collectés seront stockés dans le stockage principal de l'Institut national coréen de la santé. Bien que l'analyse actuelle soit limitée aux patients IPAH et HPAH, notre comité directeur prévoit de l'étendre à tous les types d'HTAP dans des études ultérieures. Cette étude a été approuvée par le comité d'éthique institutionnel de chaque établissement participant et est conforme à la Déclaration d'Helsinki (6e révision). Un consentement éclairé sera reçu par chaque patient.

Données de base et collecte d'échantillons biologiques Les données de base des patients enregistrés dans les 16 hôpitaux régionaux comprendront les éléments suivants : classification fonctionnelle de l'OMS, test de marche de 6 minutes, échantillon de sang, électrocardiogramme, radiographie pulmonaire, échocardiographie, test d'effort cardio-pulmonaire facultatif , IRM cardiaque en option et RHC. Des informations détaillées sur chaque examen sont spécifiées dans le tableau 2. Le patient enregistré fera l'objet d'un suivi régulier pour des données supplémentaires et la collecte d'échantillons biologiques.

Avec l'échantillon de sang du patient, l'ADN, l'ARN, le sérum, le plasma et les cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) de la couche leucocytaire seront séparés et extraits pour un stockage et des études supplémentaires. Pour l'échantillon d'ADN, 2,5 ml de sang total seront stockés dans un tube d'ADN de gène PAX sur le site de collecte, et il sera transporté au centre principal à 4 ~ 10 C. Au centre principal, il sera alors, être transféré dans un cryotube de 2 ml pour être stocké à -70 ~ 80C. Pour la collecte d'ARN du patient, 2,5 ml de sang total seront collectés au tube d'ARN du gène PAX, et il sera envoyé au centre principal à 4 ~ 10 C, qui sera également transféré dans un cryotube pour être stocké à -70 ~ 80C.

Le sérum, le plasma et le buffy coat du patient seront également collectés. Sur les sites de collecte respectifs, le sérum sera collecté dans un tube de séparation de sérum, et après 30 minutes de ponction veineuse, il sera centrifugé et stocké à -20°C. Pour le plasma du patient, le tube de préparation cellulaire sera utilisé dans les 2 heures suivant le prélèvement sanguin. Ensuite, chaque échantillon sera prêt à être stocké à -20 ° C en traitant les échantillons avec un anticorps de type sérum humain, du DMSO et un milieu de congélation. Pour séparer et extraire les PBMC, la couche leucocytaire blanche sera séparée et stockée dans un tube de 1,5 ml avec un milieu de congélation à -20 °C. Les données de référence collectées passeront ensuite par un processus de nettoyage et une évaluation plus approfondie de leur qualité sera effectuée. De plus, cinq patients seront sélectionnés pour effectuer un séquençage du génome entier. Tous les échantillons biologiques collectés seront donnés au centre de stockage des NIH et seront ensuite utilisés pour des études multi-omiques afin de phénotyper en profondeur les échantillons du patient.

Suivi des patients Tous les patients seront suivis deux fois ou plus par an, avec un taux de suivi prévu de 80 %. Au cours de la deuxième et de la troisième année, le registre des patients et la collecte des données seront poursuivis avec le même protocole. Pour maintenir la crédibilité des données collectées, le comité de pilotage surveillera et auditera en permanence les données collectées. Le protocole peut être élaboré plus avant après avoir évalué les données de l'année précédente. De plus, des stratégies efficaces de gestion des données, y compris une ligne directrice pour normaliser les mesures corporelles et les échantillons de sang des patients, seront élaborées. Dix échantillons de patients seront sélectionnés pour un séquençage de nouvelle génération, et nous serons utilisés pour découvrir de nouvelles mutations génétiques.

Analyse des mutations génétiques sur trois pedigrees pour les patients HPAH Afin de déterminer les patients atteints d'HPAH, une étude génétique familiale sera réalisée. Un pedigree sur trois générations pour chaque patient atteint d'HTAP avec ou sans l'existence d'une mutation BMPR2, ACVRL1, ENG, CAV1, SMAD1, SMAD4, SMAD9, KCNK3 et/ou EIF2AK4 sera évalué. Des échantillons de sang de membres de la famille de patients atteints d'une HPAH seront prélevés pour un dépistage génétique.