卵巣胚細胞腫瘍におけるタンパク質P16発現の免疫組織化学的評価。
卵巣胚細胞腫瘍 (OGCTs) は、エジプトの卵巣腫瘍の 10% を構成し、主に若い女性に影響を与えます。 奇形腫は最も一般的なタイプです。奇形腫のほとんどは良性です。 ただし、悪性形質転換の危険性があります。 その他は、未分化胚細胞腫、未熟奇形腫、卵黄嚢腫瘍などを含む悪性です。 若い女性のがんの 1 ～ 1.5% を占めています。 OGCTs の病因は明確に理解されていません。
P16 は、サイクリン依存性キナーゼ (CDK) 阻害剤のメンバーです。 細胞周期を G1 期で停止させるため、腫瘍抑制タンパク質として知られています。P16 免疫組織化学 (IHC) 発現は、さまざまな癌で広く調査されています。 その IHC 発現は存在しないか過剰発現しています。 p16 の過剰発現は、ヒトパピローマウイルス関連の子宮頸部腫瘍および外陰腟領域の高度な扁平上皮内病変で報告されています。
OGCT における P16 IHC の発現は十分に調査されていません。 ある研究では、p16 の欠如が分子評価による悪性 OGCT の増殖に関与していることを示唆しています。別の研究では、P16 の減少が成熟嚢胞性奇形腫から扁平上皮癌への悪性転換に関与していることが示唆されています。その結果。
OGCT における変化した P16 タンパク質の役割は広く調査されていないため、異常な P16 発現がその病因と生殖幹細胞の増殖に関与している可能性があるという仮説を立てました。 OGCTの管理における新規標的療法としてのCDK阻害剤。
調査の概要
状態
詳細な説明
この研究では、次のことを目指しています。
1-良性および悪性OGCTの腫瘍性成分におけるp16の免疫組織化学的発現を評価し、その免疫反応性を記録します。
2- MOGCT における P16 免疫組織化学的発現と Ki 67 増殖指数および FIGO 病期分類との相関。
- 研究のタイプ: 一致したケースコントロール研究。
研究対象:
- 包含基準: 良性 (成熟嚢胞性奇形腫) および悪性腫瘍 (未熟胚細胞腫、未熟奇形腫および卵黄嚢腫瘍) を含むさまざまなタイプの卵巣胚細胞腫瘍。
除外基準:
-卵巣胚細胞腫瘍以外の切除された卵巣腫瘍などの選択基準を満たさない基準、例えば、上皮性卵巣腫瘍、性索間質腫瘍または転移性卵巣病変。
- 研究プロトコルは、2019年12月にアシュート大学医学部の治験審査委員会によって承認され（IRB No.17100871）、この研究の倫理的承認は、アシュート大学医学部の医療倫理委員会から得られました。
- 研究環境: アシュート大学医学部病理学科の IHC 研究室。
- 組織サンプリング: 2010 年 1 月から 2021 年 1 月までに、アシュート大学病院 (AUH) および南エジプト癌研究所 (SECI) の外科病理学部門から、ホルマリン固定、パラフィン ワックス包埋卵巣標本 62 個を取得しました。 これらの標本には以下が含まれます。
(グループ A) 22 の悪性卵巣胚細胞腫瘍 (MOGCT)、(グループ B) 20 の見かけの正常な卵巣組織を対照群として、(グループ C) 20 の成熟した嚢胞性奇形腫を同等の良性の比較群として。
グループ A は、5 つの未熟胚細胞腫、8 つの未熟奇形腫 (そのうちの 4 つがグレード II、他の 4 つがグレード III、FIGO グレーディング システム)、および 9 つの卵黄嚢腫瘍を構成します。 患者の年齢は 12 ～ 23 歳 (中央値 16.5 歳) でした。 各 MOGCT の初期診断は、WHO の卵巣腫瘍分類に従って再評価されました。
グループ B には、非卵巣性、非悪性原因の多発性子宮筋腫および対照群としての腺筋症に対する腹式子宮全摘出術および卵管卵巣摘出術の標本とともに外科的に切除された、通常明らかな卵巣が含まれます。 患者の年齢は 42 ～ 64 歳 (中央値 50 歳) でした。
利用可能なすべてのヘマトキシリンおよびエオシン染色スライドは、2 人の独立した病理学者によって定期的な光学顕微鏡によって検査され、最も代表的な 1 つまたは 2 つの組織ブロックが免疫組織化学染色に使用されました。 臨床的および病理学的データには、病理学的報告に従って評価された病変の年齢、グレード、病期、再発が含まれます。
- 免疫組織化学: 組織サンプルは、ホルマリン固定、パラフィン包埋組織ブロックで、室温で保存されました。 選択した代表的な組織ブロックから厚さ 4 um の薄切片を切り取り、コーティングしたスライドに乗せ、70℃のオーブンで 25 分間保持し、キシレンの 2 つの容器でそれぞれ 15 分間洗浄して脱パラフィンし、アルコールの連続希釈 (100%、90%、80%、70%) で、各希釈で 5 分間。 次に、非特異的なバックグラウンドを防ぐために切片を 3% 過酸化水素で 10 分間処理した後、PBS バッファーで 4 回十分に洗浄しました。 抗原回復のために、スライドをクエン酸緩衝液 (PH = 6) に保持し、90℃で 15 分間オートクレーブし、室温まで放冷しました。 スライドをPBSバッファーで4回十分に洗浄し、組織切片を一次抗体とともにインキュベートしました。 p16INK4a Recombinant Rabbit Monoclonal Antibody (RM267) (MA5-27905) を 1:500 に希釈して一晩、二次抗体とインキュベート。各ステップで多価ポリマー-HRP を 10 分間使用した後、十分な量の 4 回の PBS バッファー洗浄を行います。 次いで、組織をジアミノベンジジン色原体（ＤＡＰ−色原体）で１０分間褐色発色のために処理した。 次に、対比染色として Mayer ヘマトキシリンで切片を 2 分間処理しました。
悪性症例のみから受け取った切片については、脱パフィンおよび 3% 水素ペルオキシダーゼによるブロッキング後の組織切片を一次抗体とインキュベートしたため、追加の Ki67 IHC 染色を追加します。 Ki67 抗体 (DAKO)、20 分間使用する準備ができた後、二次抗体とインキュベートします。多価ポリマー-HRPで20分間処理した後、茶色の発色のためにジアミノベンジジン色素原(DAP-色素原)で5分間処理した。 次に、対比染色として Mayer ヘマトキシリンで切片を 2 分間処理しました。
スライドを水道水で洗浄し、アルコールの連続希釈により脱水し、キシレンで短時間洗浄し、DPXでマウントしました。
正常な見かけの卵巣組織を対照として使用した。 ｐ１６発現をブロックする子宮頸部非角化扁平上皮癌からの切片を陽性対照として使用した。一次抗体処理なしの組織スライドをネガティブコントロールとして使用しました。
・免疫組織化学的評価：Ｐ１６ ＩＨＣ染色について、Ｐ１６陽性細胞のパーセンテージおよび陽性シグナル（核または細胞質）の位置を、すべての病変の新生物成分について視覚的に推定した。 ドイツの半定量的スコアリングシステムを使用してP16発現を評価しました。これは、細胞質および核の染色の強度に応じてすべての腫瘍にスコアが付けられるためです（染色なし= 0、弱い染色= 1、中程度の染色= 2、強い染色= 3 ) 染色された細胞の程度 (0% = 0、1-10% = 1、11-50% = 2、51-80% = 3、81-100% = 4)。 最終的な免疫反応性スコアは、強度スコアに染色細胞の陽性スコアの程度を掛けることによって決定されます。最小スコアは 0、最大スコアは 12 (スコア 0、1、2、3、4、6、8、 9および12）。
悪性症例のみの KI67 IHC 染色では、検査したすべての切片の染色強度に関係なく、核陽性染色細胞の割合を評価しました (KI インデックスの推定のために切片あたり少なくとも 1000 個の腫瘍細胞をカウントしました)。
-統計分析: IBM-SPSS バージョン 24 を使用してデータを分析しました。 数値データは平均値と標準偏差として提示され、カテゴリデータは数とパーセンテージとして提示されました。 記述統計量: 平均、標準偏差、中央値、範囲、およびパーセンテージが計算されました。 有意性の検定: 3 つ以上のカテゴリを持つ連続変数の場合。 ANOVA 検定を計算して、正規分布に従うデータの平均差を検定し、独立したサンプルのクラスカル・ウォリスを使用して、正規分布に従わないグループ間の中央値の差を比較し、事後検定をボンフェローニ補正を使用して計算しました。 相関分析を使用した (スピアマンの順位相関、両側)。
p 値 < 0.05 は有意と見なされました。
研究の種類
入学 (実際)
連絡先と場所
研究場所
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Assiut、エジプト、71111
- Assiut University
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参加基準
適格基準
就学可能な年齢
健康ボランティアの受け入れ
受講資格のある性別
サンプリング方法
調査対象母集団
62 のホルマリン固定、パラフィン ワックス包埋卵巣標本。これらの標本には以下が含まれます。
(グループ A) 22 個の悪性卵巣胚細胞腫瘍 (MOGCT): 5 個の胚細胞腫、8 個の未熟奇形腫 (4 個はグレード II、他の 4 個はグレード III、FIGO グレーディング システム)、9 個の卵黄嚢腫瘍。 患者の年齢は 12 ～ 23 歳 (中央値 16.5 歳) でした。 最初の診断は、卵巣腫瘍の WHO 分類に従って再評価されました。
、（グループＢ）非卵巣、非悪性の原因のためにＴＡＨおよび卵管切開術で外科的に切除された対照群としての２０の見かけの正常な卵巣組織。 患者の年齢は 42 ～ 64 歳 (中央値 50 歳) でした。
(グループ C) 同等の良性の比較グループとして 20 の成熟した嚢胞性奇形腫。
説明
包含基準:
卵巣胚細胞腫瘍 :
- 20 良性 (成熟した嚢胞性奇形腫)。
- 悪性のものは22件（未分化胚細胞腫5件、未熟奇形腫8件、卵黄嚢腫瘍9件）でした。
- 20 正常な卵巣。
除外基準:
- 上皮性卵巣腫瘍
- 性索 - 間質性卵巣腫瘍。
- 転移性卵巣病変。
研究計画
研究はどのように設計されていますか？
デザインの詳細
- 観測モデル：ケースコントロール
- 時間の展望：回顧
コホートと介入
グループ/コホート |
介入・治療 |
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悪性卵巣胚細胞腫瘍 (MOGCT)。
22例の悪性卵巣胚細胞腫瘍;未分化胚細胞腫、卵黄嚢腫瘍、未熟奇形腫などは、抗P16抗体とKi67抗体で治療されます。
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P16INK4a Recombinant Rabbit Monoclonal Antibody (RM267) による免疫組織化学的方法によるグループに関連するパラフィン包埋ブロックから切り出したスライドの処理。
悪性症例群に関連するパラフィン包埋ブロックから切り出したスライドをKi67抗体による免疫組織化学法で処理。
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成熟嚢胞性奇形腫。
成熟奇形腫の 20 例は、抗 P16 抗体によって治療されます。
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P16INK4a Recombinant Rabbit Monoclonal Antibody (RM267) による免疫組織化学的方法によるグループに関連するパラフィン包埋ブロックから切り出したスライドの処理。
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通常明らかな卵巣。
正常に見える卵巣の 20 例は、抗 P16 抗体によって治療されます。
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P16INK4a Recombinant Rabbit Monoclonal Antibody (RM267) による免疫組織化学的方法によるグループに関連するパラフィン包埋ブロックから切り出したスライドの処理。
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この研究は何を測定していますか？
主要な結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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P16 卵巣胚細胞腫瘍における評価
時間枠：評価されたセクションの実行ごとに最大 3 日間評価された一晩の抗体曝露。
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P16 IHC染色では、すべての病変の新生物成分について、P16陽性細胞の割合と陽性シグナル（核または細胞質）の位置を視覚的に推定しました。
ドイツの半定量的スコアリングシステムを使用してP16発現を評価しました。これは、細胞質および核の染色の強度に応じてすべての腫瘍にスコアが付けられるためです（染色なし= 0、弱い染色= 1、中程度の染色= 2、強い染色= 3 ) 染色された細胞の程度 (0% = 0、1-10% = 1、11-50% = 2、51-80% = 3、81-100% = 4)。
最終的な免疫反応性スコアは、強度スコアに染色細胞の陽性スコアの程度を掛けることによって決定されます。最小スコアは 0、最大スコアは 12 (スコア 0、1、2、3、4、6、8、 9および12）。
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評価されたセクションの実行ごとに最大 3 日間評価された一晩の抗体曝露。
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悪性卵巣胚細胞腫瘍におけるKi67発現の測定。
時間枠：抗体曝露 2 時間、評価された切片の実行ごとに 1 日まで評価。
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悪性症例の KI67 IHC 染色では、検査したすべての切片の染色強度に関係なく、核陽性染色細胞のパーセンテージを評価しました (KI インデックスの推定のために切片あたり少なくとも 1000 個の腫瘍細胞をカウントしました)。相関分析を使用して関連性をテストしました。 Ki-67 と他の変数の間 (Spearman のランク付けされた相関)。
p 値 < 0.05 は有意と見なされました。
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抗体曝露 2 時間、評価された切片の実行ごとに 1 日まで評価。
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二次結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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P16 細胞質スコアと MOGCT の FIGO 病期分類との相関。
時間枠：結果取得後、生データ収集後、2ヶ月以内。
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P16 細胞質スコアは、染色強度のスコア (0 = なし、1 = 弱い、2 = 中程度、3 = 強い) を染色強度のスコア (0 = 10% 未満、1 = 11- 20 % , 2= 21-50 % , 3= 51-80% , 4= 80% 以上) 最終スコア範囲 (0、1、2、4、6、8、9 および 12) を誘導します。 卵巣腫瘍に対する FIGO 病期分類システムは、ステージ I (卵巣に限る)、II (骨盤拡張を伴う)、III (腹膜拡張を伴う)、および IV (遠隔転移を伴う) であり、患者の医療記録から報告されています。 一元配置分散分析を使用して、グループ間の平均値の差を調べました。 ボンフェローニ補正による事後検定をペアワイズ比較に使用しました。 データは平均 (SD) として表されました。 p 値 < 0.05 は有意と見なされました。 |
結果取得後、生データ収集後、2ヶ月以内。
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協力者と研究者
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捜査官
- 主任研究者：Omar Ahmed, Master、Pathology department- Faculty of medicine - Assiut university
研究記録日
主要日程の研究
研究開始 (実際)
一次修了 (実際)
研究の完了 (実際)
試験登録日
最初に提出
QC基準を満たした最初の提出物
最初の投稿 (実際)
学習記録の更新
投稿された最後の更新 (実際)
QC基準を満たした最後の更新が送信されました
最終確認日
詳しくは
本研究に関する用語
キーワード
追加の関連 MeSH 用語
その他の研究ID番号
- 17100871
- 2019-09-05-001-R1 (その他の助成金/資金番号：Grant office - faculty of medicine - Assiut university)
個々の参加者データ (IPD) の計画
個々の参加者データ (IPD) を共有する予定はありますか?
試験データ・資料
医薬品およびデバイス情報、研究文書
米国FDA規制医薬品の研究
米国FDA規制機器製品の研究
米国で製造され、米国から輸出された製品。
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