GBMにおけるプログラム死リガンド1およびLC3Bの免疫組織化学的評価

神経膠腫は、すべての原発性脳腫瘍のほぼ 30% を占め、原発性脳腫瘍による死亡の大部分を占めています。

膠芽腫は、成人で最も一般的な原発性悪性脳腫瘍であり、神経膠腫の 60 ～ 70%、原発性脳腫瘍の 15% を占めています。 神経膠芽腫は、最も攻撃的で未分化型の神経膠腫であり、WHO グレード IV に指定されています。

プログラム細胞死 1 (PD-1) は、免疫チェックポイントとして機能するタンパク質受容体です。 T細胞に抑制シグナルを伝えます。 癌では、細胞傷害性Tリンパ球(CTL)から腫瘍を保護します。 PD1 と T 細胞の表面上のリガンド PD-L1 との相互作用により、その機能が抑制され、腫瘍細胞の認識が妨げられます。PD-L1 の発現は、腫瘍内 CD8+ (Cluster of Differentiation 8) T 細胞の密度と逆相関します。 .

オートファジーは、リソソーム消化による細胞の分解とリサイクルにつながる異化プロセスです。 したがって、細胞がストレスに適応できるようになります）。 オートファジーは、放射線や化学療法などのストレス下での生存促進の役割により、腫瘍の発生、進行、および治療抵抗性を促進します。 LC3B (microtubule associated protein light chain 3 B) は、オートファジーを監視するために一般的に使用されるマーカーです。PD-L1 はオートファジーに関連しています。 マウス黒色腫細胞およびヒト卵巣癌細胞を用いた実験からの最近の発見は、高レベルの PD-L1 を発現する細胞が、PD-L1 を弱く発現する細胞よりもオートファジー阻害剤に対してより感受性であることを示しました。 この発見は、がん管理の新しい手段として、PD-L1過剰発現細胞でオートファジー阻害剤を使用する潜在的な機会を提供します . したがって、これまで GBM で研究されていなかった、私たちの研究は純粋な新規研究です。

著者らは、PD-L1 と LC3B の両方が GBM 細胞で高度に発現しており、PDL1 の高度な発現は CTL 数の低下と関連していると仮定しています。 PD-L1 および LC3B マーカーのレベルの上昇は、免疫阻害、オートファジーの増加、および予後不良を示している可能性があるため、それらの阻害には治療上の利点があります。

今日まで、私たちの知る限り、この仮説は特に私たちの地域では完全には検証されていません. 私たちの仮説を探求するために、この作業は 3 つの具体的な目的で構成されています。

1. GBM における PD-L1 発現と CTL 数との関係を評価する。
2. GBM における PDL-1 と LC3B の発現を評価し、それらの関係を評価する。
3. GBM における PDL-1 および LC3B の予後関連性を、それらの発現レベルをいくつかの確立された予後因子 (患者の年齢、多発性腫瘍、全切除または亜全切除、腫瘍の再増殖、カルノフスキー パフォーマンス スコア、および組織病理学的特徴: 壊死) に関連付けることによって調査すること。 .

約 61 例の GBM のホルマリン固定パラフィン包埋組織標本と、近くにある明らかに正常な脳組織が、民間の研究所から入手されます。

H&E 染色切片の組織学的診断がレビューされ、組織学的予後基準が評価されます。

免疫ペルオキシダーゼ染色によるマウスモノクローナル抗体を使用した、PDL-1、CD8、およびLC3Bの免疫組織化学染色を視覚化方法として使用します。 抗体の希釈、抗原回復方法、およびインキュベーション時間はすべて、製造元の指示に従って実施されます。

サンプル サイズの計算は、G*Power 3 ソフトウェアを使用して実行されました。 61 人の神経膠芽腫患者の計算されたサンプルは、0.1 の効果サイズ (PD-L1 発現レベルの多変量 Cox ハザード比率回帰で 1.54 から 1.74 の範囲の HR) を検出するために必要であり、エラー確率は 0.05 および 80% 検出力です片側検定で。

PD-L1、CTL 数、および LC3B 発現と GBM の予後判定基準との相関関係は、コンピューター ソフトウェア SPSS (社会科学用統計パッケージ) を使用して実行されます。