Immunhistochemische Bewertung von programmiertem Todesliganden1 und LC3B bei GBM

Gliome machen fast 30 % aller primären Hirntumoren aus und sind für die Mehrzahl der Todesfälle durch primäre Hirntumoren verantwortlich.

Das Glioblastom ist der häufigste primäre bösartige Hirntumor bei Erwachsenen und macht 60-70 % der Gliome und 15 % der primären Hirntumoren aus. Das Glioblastom ist die aggressivste und undifferenzierte Art von Gliom und wird als WHO-Grad IV bezeichnet.

Der programmierte Zelltod 1 (PD-1) ist ein Proteinrezeptor, der als Immun-Checkpoint fungiert. Es übermittelt ein hemmendes Signal an T-Zellen. Bei Krebs schützt es Tumore vor zytotoxischen T-Lymphozyten (CTL). Die Wechselwirkung von PD1 mit seinem Liganden PD-L1 auf der Oberfläche von T-Zellen unterdrückt deren Funktion und behindert die Erkennung von Tumorzellen. Die PD-L1-Expression ist umgekehrt korreliert mit der Dichte von intratumoralen CD8+ (Cluster of Differentiation 8) T-Zellen .

Autophagie ist ein katabolischer Prozess, der zu zellulärem Abbau und Recycling durch lysosomale Verdauung führt. Dadurch können sich die Zellen an Stress anpassen). Autophagie fördert die Tumorentwicklung, -progression und Therapieresistenz aufgrund ihrer überlebensfördernden Rolle unter Stress wie Bestrahlung und Chemotherapie. LC3B (Microtubule Associated Protein Light Chain 3 B) ist ein häufig verwendeter Marker zur Überwachung der Autophagie. PD-L1 wurde mit der Autophagie in Verbindung gebracht. Jüngste Ergebnisse aus Experimenten mit murinen Melanomzellen und menschlichen Eierstockkrebszellen zeigten, dass Zellen, die hohe Konzentrationen von PD-L1 exprimieren, empfindlicher auf Autophagie-Inhibitoren reagieren als Zellen, die PD-L1 schwach exprimieren. Diese Erkenntnis bietet potenzielle Möglichkeiten für den Einsatz von Autophagie-Inhibitoren in PD-L1-überexprimierenden Zellen als neuen Weg in der Krebsbehandlung. Unsere Studie wurde also zuvor nicht in GBM untersucht und ist eine reine Romanstudie.

Die Autoren stellen die Hypothese auf, dass sowohl PD-L1 als auch LC3B in GBM-Zellen stark exprimiert werden und eine hohe PDL1-Expression mit einer niedrigen CTL-Zahl assoziiert ist. Es ist möglich, dass erhöhte Werte von PD-L1- und LC3B-Markern auf eine Immunhemmung, eine erhöhte Autophagie und eine schlechte Prognose hindeuten, sodass ihre Hemmung einen therapeutischen Nutzen haben wird.

Bis heute und nach unserem besten Wissen wurde diese Hypothese insbesondere an unserem Standort nicht vollständig getestet. Um unsere Hypothese zu untersuchen, ist diese Arbeit in drei spezifische Ziele gegliedert:

1. Bewertung der Beziehung zwischen PD-L1-Expression und CTL-Anzahl bei GBM.
2. Bewertung der Expression von PDL-1 und LC3B in GBM und Bewertung ihrer Beziehung.
3. Die prognostische Relevanz von PDL-1 und LC3B bei GBM zu untersuchen, indem das Ausmaß ihrer Expression mit einigen etablierten prognostischen Faktoren (Alter des Patienten, multifokaler Tumor, vollständige oder subtotale Exzision, Tumorwachstum, Karnofsky-Performance-Score und histopathologisches Merkmal wie: Nekrose) in Beziehung gesetzt wird. .

Formalin-fixierte, in Paraffin eingebettete Gewebeproben von etwa 61 Fällen von GBM und in der Nähe von scheinbar normalem Gehirngewebe werden von einem Privatlabor erhalten.

Die histologische Diagnose von H&E-gefärbten Schnitten wird überprüft und die histologischen Prognosekriterien werden bewertet.

Als Visualisierungsmethode wird eine immunhistochemische Färbung für PDL-1, CD8 und LC3B unter Verwendung von monoklonalen Maus-Antikörpern mit Immunoperoxidase-Färbung verwendet. Antikörperverdünnungen, Antigen-Gewinnungsmethoden und Inkubationszeit werden alle gemäß den Anweisungen des Herstellers durchgeführt.

Die Berechnung der Stichprobengröße wurde mit der Software G*Power 3 durchgeführt. Eine berechnete Stichprobe von 61 Glioblastompatienten wird benötigt, um eine Effektgröße von 0,1 (HR lag zwischen 1,54 und 1,74 in der multivariaten Cox-Hazard-Proportion-Regression für das PD-L1-Expressionsniveau) mit einer Fehlerwahrscheinlichkeit von 0,05 und 80 % Leistung zu erkennen bei einem einseitigen Test.

Die Korrelation zwischen PD-L1, CTL-Zählung und LC3B-Expression und prognostischen Kriterien von GBM wird unter Verwendung einer Computersoftware SPSS (Statistical Package for Social Sciences) durchgeführt.