Immunohistochemische beoordeling van geprogrammeerde dood ligand1 en LC3B in GBM

Gliomen zijn goed voor bijna 30% van alle primaire hersentumoren en zijn verantwoordelijk voor de meerderheid van de sterfgevallen als gevolg van primaire hersentumoren.

Glioblastoom is de meest voorkomende primaire kwaadaardige hersentumor bij volwassenen, goed voor 60-70% van de gliomen en 15% van de primaire hersentumoren. Glioblastoom is het meest agressieve en ongedifferentieerde type glioom en wordt aangeduid als WHO-graad IV.

Geprogrammeerde celdood 1 (PD-1) is een eiwitreceptor die functioneert als een immuuncontrolepunt. Het brengt een remmend signaal over naar T-cellen. Bij kanker beschermt het tumoren tegen cytotoxische T-lymfocyten (CTL). De interactie van PD1 met zijn ligand PD-L1 op het oppervlak van T-cellen onderdrukt hun functie en belemmert de herkenning van tumorcellen. PD-L1-expressie is omgekeerd gecorreleerd met de dichtheid van intratumorale CD8+ (Cluster of Differentiation 8) T-cellen .

Autofagie is een katabool proces dat leidt tot cellulaire afbraak en recycling door lysosomale spijsvertering. Waardoor cellen zich kunnen aanpassen aan stress). Autofagie bevordert tumorontwikkeling, progressie en therapieresistentie vanwege zijn pro-overlevingsrol onder stress zoals bestraling en chemotherapie. LC3B (microtubule-geassocieerde eiwit lichte keten 3B) is een veelgebruikte marker om autofagie te controleren. PD-L1 is in verband gebracht met autofagie. Recente bevindingen van experimenten met muriene melanoomcellen en menselijke eierstokkankercellen gaven aan dat cellen die hoge niveaus van PD-L1 tot expressie brengen, gevoeliger zijn voor autofagieremmers dan cellen die PD-L1 zwak tot expressie brengen. Deze bevinding biedt potentiële mogelijkheden voor het gebruik van autofagie-remmers in cellen die PD-L1 tot overexpressie brengen als een nieuwe weg in de behandeling van kanker. Dus niet eerder bestudeerd in GBM, onze studie is pure nieuwe studie.

De auteurs veronderstellen dat zowel PD-L1 als LC3B in hoge mate tot expressie worden gebracht in GBM-cellen en dat een hoge PDL1-expressie geassocieerd is met een laag aantal CTL's. Het is mogelijk dat verhoogde niveaus van PD-L1- en LC3B-markers duiden op immuunremming, verhoogde autofagie en een slechte prognose, dus hun remming zal therapeutisch voordeel hebben.

Tot op heden en voor zover wij weten, is deze hypothese niet volledig getest, vooral niet in onze plaats. Om onze hypothese te onderzoeken, is dit werk georganiseerd in drie specifieke doelstellingen:

1. Om de relatie tussen PD-L1-expressie en CTL-telling in GBM te evalueren.
2. De expressie van PDL-1 en LC3B in GBM evalueren en hun relatie beoordelen.
3. Om de prognostische relevantie van PDL-1 en LC3B in GBM te onderzoeken door het niveau van hun expressie te relateren aan enkele gevestigde prognostische factoren (leeftijd van de patiënt, multifocale tumor, totale of subtotale excisie, hergroei van tumoren, prestatiescore van Karnofsky en histopathologisch kenmerk zoals: necrose) .

Formaline-gefixeerde-paraffine-ingebedde weefselspecimens van ongeveer eenenzestig gevallen van GBM en nabijgelegen ogenschijnlijk normaal hersenweefsel zullen worden verkregen uit een privélaboratorium.

De histologische diagnose van met H&E gekleurde coupes zal worden beoordeeld en de histologische prognostische criteria zullen worden beoordeeld.

Immunohistochemische kleuring voor PDL-1, CD8 en LC3B met behulp van monoklonale antilichamen van muizen met immunoperoxidasekleuring zal worden gebruikt als visualisatiemethode. Verdunningen van antilichamen, methoden voor het ophalen van antigeen en incubatietijd worden allemaal uitgevoerd volgens de instructies van de fabrikant.

De berekening van de steekproefomvang werd uitgevoerd met behulp van G*Power 3-software. Er is een berekende steekproef van 61 glioblastoompatiënten nodig om een ​​effectgrootte van 0,1 te detecteren (HR varieerde tussen 1,54 en 1,74 in de multivariate Cox Hazard Proportion Regression voor het PD-L1-expressieniveau), met een foutkans van 0,05 en 80% power op een eenzijdige toets.

Correlatie tussen PD-L1, CTL-telling en LC3B-expressie en prognostische criteria van GBM zal worden uitgevoerd met behulp van computersoftware SPSS (Statistical Package for Social Sciences).