Avaliação imuno-histoquímica do ligante de morte programada1 e LC3B em GBM

Os gliomas representam quase 30% de todos os tumores cerebrais primários e são responsáveis ​​pela maioria das mortes por tumores cerebrais primários.

O glioblastoma é o tumor cerebral maligno primário mais comum em adultos, representando 60-70% dos gliomas e 15% dos tumores cerebrais primários. O glioblastoma é o tipo de glioma mais agressivo e indiferenciado e designado como Grau IV da OMS.

A morte celular programada 1 (PD-1) é um receptor de proteína que funciona como um ponto de controle imunológico. Ele transmite um sinal inibitório para as células T. No câncer, protege os tumores dos linfócitos T citotóxicos (CTL). A interação de PD1 com seu ligante PD-L1 na superfície das células T suprime sua função e dificulta o reconhecimento de células tumorais. .

A autofagia é um processo catabólico que leva à degradação celular e à reciclagem pela digestão lisossômica. Permitindo assim que as células se adaptem ao estresse). A autofagia promove o desenvolvimento do tumor, progressão e resistência à terapia devido ao seu papel pró-sobrevivência sob estresse como radiação e quimioterapia. LC3B (cadeia leve de proteína associada a microtúbulos 3 B) é um marcador comumente usado para monitorar a autofagia. O PD-L1 tem sido relacionado à autofagia. Descobertas recentes de experimentos com células de melanoma murino e células de câncer de ovário humano indicaram que células que expressam altos níveis de PD-L1 são mais sensíveis a inibidores de autofagia do que células que expressam fracamente PD-L1. Essa descoberta oferece oportunidades potenciais para o uso de inibidores de autofagia em células com superexpressão de PD-L1 como um novo caminho no tratamento do câncer. Portanto, não estudado no GBM antes, nosso estudo é um estudo de romance puro.

Os autores levantam a hipótese de que tanto PD-L1 quanto LC3B são altamente expressos em células GBM e a alta expressão de PDL1 está associada à baixa contagem de CTL. É possível que níveis elevados de marcadores PD-L1 e LC3B indiquem inibição imune, aumento da autofagia e mau prognóstico, portanto, sua inibição terá benefício terapêutico.

Até o momento e tanto quanto sabemos, esta hipótese não foi totalmente testada, especialmente em nossa localidade. Para explorar nossa hipótese, este trabalho está organizado em três objetivos específicos:

1. Avaliar a relação entre a expressão de PD-L1 e a contagem de CTL no GBM.
2. Avaliar a expressão de PDL-1 e LC3B no GBM e avaliar sua relação.
3. Explorar a relevância prognóstica de PDL-1 e LC3B no GBM, relacionando o nível de sua expressão a alguns fatores prognósticos estabelecidos (idade do paciente, tumor multifocal, excisão total ou subtotal, rebrota tumoral, pontuação de desempenho de Karnofsky e características histopatológicas como: necrose) .

Espécimes de tecido fixados em formalina e embebidos em parafina de cerca de sessenta e um casos de GBM e tecido cerebral adjacente aparentemente normal serão obtidos de laboratório privado.

O diagnóstico histológico das seções coradas com H&E será revisado e os critérios prognósticos histológicos serão avaliados.

A coloração imuno-histoquímica para PDL-1, CD8 e LC3B utilizando anticorpos monoclonais de camundongo com coloração por imunoperoxidase será utilizada como método de visualização. As diluições de anticorpos, os métodos de recuperação de antígenos e o tempo de incubação serão conduzidos de acordo com as instruções do fabricante.

O cálculo do tamanho da amostra foi realizado no software G*Power 3 . Uma amostra calculada de 61 pacientes com glioblastoma será necessária para detectar um tamanho de efeito de 0,1 (HR variou entre 1,54 e 1,74 na regressão multivariada de Cox Hazard Proportion para o nível de expressão PD-L1), com uma probabilidade de erro de 0,05 e 80% de poder em um teste unilateral.

A correlação entre PD-L1, contagem de CTL e expressão de LC3B e critérios prognósticos de GBM será realizada usando um software de computador SPSS (Statistical Package for Social Sciences).