A programozott halál ligand1 és LC3B immunhisztokémiai értékelése GBM-ben

A gliómák az összes primer agydaganat csaknem 30%-át teszik ki, és az elsődleges agydaganatok okozta halálozások többségéért felelősek.

A glioblasztóma a leggyakoribb elsődleges rosszindulatú agydaganat felnőtteknél, a gliomák 60-70%-át és az elsődleges agydaganatok 15%-át teszi ki. A glioblasztóma a glióma legagresszívebb és legdifferenciálatlanabb típusa, és a WHO IV. fokozata.

A programozott sejthalál 1 (PD-1) egy fehérjereceptor, amely immunellenőrző pontként működik. Gátló jelet közvetít a T-sejtek felé. Rák esetén megvédi a daganatokat a citotoxikus T-limfocitáktól (CTL). A PD1 kölcsönhatása ligandumával, a PD-L1-gyel a T-sejtek felszínén elnyomja funkciójukat és gátolja a tumorsejtek felismerését. A PD-L1 expressziója fordítottan korrelál az intratumorális CD8+ (8. differenciálódási klaszter) T-sejtek sűrűségével. .

Az autofágia egy katabolikus folyamat, amely a sejtek lebomlásához és a lizoszómális emésztés révén történő újrahasznosításhoz vezet. Így lehetővé teszi a sejtek alkalmazkodását a stresszhez). Az autofágia elősegíti a daganatok kialakulását, progresszióját és a terápiarezisztenciát, mivel túlélést elősegítő szerepe van stresszben, mint a sugárzás és a kemoterápia. Az LC3B (microtubulus asszociált fehérje könnyű lánc 3 B) egy általánosan használt marker az autofágia monitorozására. A PD-L1 összefüggést mutatott az autofágiával. A rágcsáló melanóma sejtekkel és humán petefészekrák sejtekkel végzett kísérletek legújabb eredményei azt mutatták, hogy a magas PD-L1-szintet expresszáló sejtek érzékenyebbek az autofágia-gátlókra, mint a PD-L1-et gyengén expresszáló sejtek. Ez a felfedezés potenciális lehetőségeket kínál az autofágia-inhibitorok alkalmazására a PD-L1-túlexpresszáló sejtekben, mint új utat a rákkezelésben. Így korábban nem vizsgálták GBM-ben, a mi tanulmányunk pusztán újszerű tanulmány.

A szerzők azt feltételezik, hogy mind a PD-L1, mind az LC3B erősen expresszálódik a GBM sejtekben, és a magas PDL1 expresszió alacsony CTL-számmal jár. Lehetséges, hogy a PD-L1 és LC3B markerek emelkedett szintje immungátlásra, fokozott autofágiára és rossz prognózisra utal, így gátlásuk terápiás előnyökkel jár.

A mai napig és legjobb tudomásunk szerint ez a hipotézis nem került teljes körűen tesztelésre, különösen a mi helyünkön. Hipotézisünk feltárása érdekében ez a munka három konkrét célból áll:

1. A PD-L1 expresszió és a CTL-szám közötti kapcsolat értékelése GBM-ben.
2. A PDL-1 és LC3B expressziójának értékelése GBM-ben és kapcsolatuk felmérése.
3. A PDL-1 és LC3B prognosztikai jelentőségének feltárása GBM-ben, expressziójuk szintjének néhány megállapított prognosztikai tényezőhöz való viszonyításával (beteg életkora, multifokális daganat, teljes vagy részösszeg kimetszés, tumor újranövekedése, Karnofsky teljesítménypontszám és hisztopatológiai jellemzők, mint: nekrózis) .

Körülbelül hatvanegy GBM-eset és a közeli, látszólag normális agyszövet formalin-fixált-paraffinba ágyazott szövetmintáit magánlaboratóriumból szerzik be.

A H&E-vel festett metszetek szövettani diagnózisát felülvizsgálják, és értékelik a szövettani prognosztikai kritériumokat.

Vizualizációs módszerként a PDL-1, CD8 és LC3B immunhisztokémiai festését alkalmazzuk egér monoklonális antitestekkel immunoperoxidáz festéssel. Az antitestek hígítását, az antigén-visszanyerési módszereket és az inkubációs időt a gyártó utasításai szerint kell végrehajtani.

A minta méretének kiszámítása G*Power 3 szoftverrel történt. 61 glioblasztómás betegből álló kiszámított mintára lesz szükség a 0,1-es hatásméret kimutatásához (a HR 1,54 és 1,74 között volt a többváltozós Cox Hazard Proportion Regression-ban a PD-L1 expressziós szintre), 0,05-ös hiba valószínűséggel és 80%-os teljesítménnyel. egyoldalú teszten.

A PD-L1, a CTL-szám és az LC3B expressziója, valamint a GBM prognosztikai kritériumai közötti korrelációt az SPSS (Statistical Package for Social Sciences) számítógépes szoftverrel végezzük.