Immunhistokemisk bedömning av programmerad dödligand1 och LC3B i GBM

Gliom står för nästan 30 % av alla primära hjärntumörer och är ansvariga för majoriteten av dödsfallen från primära hjärntumörer.

Glioblastom är den vanligaste primära maligna hjärntumören hos vuxna och står för 60-70 % av gliom och 15 % av primära hjärntumörer. Glioblastom är den mest aggressiva och odifferentierade typen av gliom och betecknas WHO Grade IV.

Programmerad celldöd 1 (PD-1) är en proteinreceptor som fungerar som en immunkontroll. Det förmedlar en hämmande signal till T-celler. Vid cancer skyddar det tumörer från cytotoxiska T-lymfocyter (CTL). Interaktionen mellan PD1 och dess ligand PD-L1 på ytan av T-celler undertrycker deras funktion och hindrar igenkännandet av tumörceller. PD-L1-uttryck är omvänt korrelerat med tätheten hos intratumorala CD8+ (Cluster of Differentiation 8) T-celler .

Autofagi är en katabolisk process som leder till cellulär nedbrytning och återvinning genom lysosomal matsmältning. På så sätt tillåter cellerna att anpassa sig till stress). Autophagy främjar tumörutveckling, progression och terapiresistens på grund av dess pro-överlevnadsroll under stress som strålning och kemoterapi. LC3B (mikrotubulusassocierad protein lätt kedja 3 B) är en vanlig markör för att övervaka autofagi. PD-L1 har relaterats till autofagi. Nya fynd från experiment med murina melanomceller och humana äggstockscancerceller indikerade att celler som uttrycker höga nivåer av PD-L1 är mer känsliga för autofaginhibitorer än celler som uttrycker PD-L1 svagt. Detta fynd ger potentiella möjligheter att använda autofagi-hämmare i PD-L1-överuttryckande celler som en ny väg i cancerhantering. Således inte studerat i GBM tidigare, vår studie är en ren ny studie.

Författarna antar att både PD-L1 och LC3B är mycket uttryckta i GBM-celler och högt PDL1-uttryck är associerat med lågt CTL-antal. Det är möjligt att förhöjda nivåer av PD-L1- och LC3B-markörer indikerar immunhämning, ökad autofagi och dålig prognos, så deras hämning kommer att ha terapeutisk fördel.

Hittills och så vitt vi vet har denna hypotes inte testats fullständigt, särskilt på vår ort. För att utforska vår hypotes är detta arbete organiserat i tre specifika syften:

1. För att utvärdera sambandet mellan PD-L1-uttryck och CTL-antal i GBM.
2. Att utvärdera uttrycket av PDL-1 och LC3B i GBM och att bedöma deras förhållande.
3. Att utforska den prognostiska relevansen av PDL-1 och LC3B i GBM genom att relatera nivån av deras uttryck till några etablerade prognostiska faktorer (patientens ålder, multifokal tumör, total eller subtotal excision, tumöråterväxt, karnofsky prestationspoäng och histopatologiska egenskaper som: nekros) .

Formalinfixerade-paraffininbäddade vävnadsprover av cirka sextioett fall av GBM och närliggande uppenbarligen normal hjärnvävnad kommer att erhållas från privata laboratorium.

Histologisk diagnos av H&E-färgade sektioner kommer att ses över och de histologiska prognostiska kriterierna kommer att bedömas.

Immunhistokemisk färgning för PDL-1, CD8 och LC3B med användning av musmonoklonala antikroppar med immunoperoxidasfärgning kommer att användas som en visualiseringsmetod. Antikroppsspädningar, metoder för antigenåtervinning och inkubationstid kommer alla att utföras enligt tillverkarens instruktioner.

Beräkning av provstorleken utfördes med hjälp av programvaran G*Power 3. Ett beräknat urval av 61 glioblastompatienter kommer att behövas för att detektera en effektstorlek på 0,1 (HR varierade mellan 1,54 och 1,74 i den multivariata Cox Hazard Proportion Regression för PD-L1-uttrycksnivån), med en felsannolikhet på 0,05 och 80 % effekt. på ett ensidigt test.

Korrelation mellan PD-L1, CTL-antal och LC3B-uttryck och prognostiska kriterier för GBM kommer att utföras med hjälp av en datorprogramvara SPSS (Statistical Package for Social Sciences).