Immunohistochemiczna ocena ligandu zaprogramowanej śmierci 1 i LC3B w GBM

Glejaki stanowią prawie 30% wszystkich pierwotnych guzów mózgu i są odpowiedzialne za większość zgonów z powodu pierwotnych guzów mózgu.

Glejak wielopostaciowy jest najczęstszym pierwotnym złośliwym guzem mózgu u dorosłych, stanowiącym 60-70% glejaków i 15% pierwotnych guzów mózgu. Glejak wielopostaciowy jest najbardziej agresywnym i niezróżnicowanym rodzajem glejaka i został oznaczony przez WHO stopnia IV.

Programowana śmierć komórki 1 (PD-1) jest receptorem białkowym, który działa jako immunologiczny punkt kontrolny. Przekazuje hamujący sygnał limfocytom T. W raku chroni nowotwory przed cytotoksycznymi limfocytami T (CTL). Interakcja PD1 z jego ligandem PD-L1 na powierzchni limfocytów T hamuje ich funkcję i utrudnia rozpoznawanie komórek nowotworowych. Ekspresja PD-L1 jest odwrotnie skorelowana z gęstością limfocytów T CD8+ (Cluster of Differentiation 8) wewnątrz guza .

Autofagia to proces kataboliczny, który prowadzi do degradacji komórek i recyklingu poprzez trawienie lizosomalne. W ten sposób umożliwiając komórkom przystosowanie się do stresu). Autofagia sprzyja rozwojowi guza, progresji i oporności na terapię ze względu na jej pro-przeżyciową rolę w stresie, takim jak promieniowanie i chemioterapia. LC3B (łańcuch lekki 3 B białka związanego z mikrotubulami) jest powszechnie stosowanym markerem do monitorowania autofagii. PD-L1 jest powiązany z autofagią. Ostatnie odkrycia z eksperymentów z mysimi komórkami czerniaka i ludzkimi komórkami raka jajnika wykazały, że komórki wykazujące wysoki poziom PD-L1 są bardziej wrażliwe na inhibitory autofagii niż komórki, które wykazują słabą ekspresję PD-L1. To odkrycie stwarza potencjalne możliwości zastosowania inhibitorów autofagii w komórkach z nadekspresją PD-L1 jako nowej drogi w leczeniu raka. Tak więc nie badane wcześniej w GBM, nasze badanie jest czysto nowatorskim badaniem.

Autorzy wysuwają hipotezę, że zarówno PD-L1, jak i LC3B ulegają silnej ekspresji w komórkach GBM, a wysoka ekspresja PDL1 jest związana z niską liczbą CTL. Możliwe, że podwyższone poziomy markerów PD-L1 i LC3B wskazują na hamowanie immunologiczne, zwiększoną autofagię i złe rokowanie, a zatem ich hamowanie będzie miało korzyść terapeutyczną.

Do tej pory i zgodnie z naszą najlepszą wiedzą hipoteza ta nie została w pełni przetestowana, zwłaszcza w naszej miejscowości. Aby zbadać naszą hipotezę, niniejsza praca jest podzielona na trzy konkretne cele:

1. Ocena związku między ekspresją PD-L1 a liczbą CTL w GBM.
2. Ocena ekspresji PDL-1 i LC3B w GBM oraz ocena ich związku.
3. Zbadanie znaczenia prognostycznego PDL-1 i LC3B w GBM poprzez powiązanie poziomu ich ekspresji z niektórymi ustalonymi czynnikami prognostycznymi (wiek pacjenta, guz wieloogniskowy, całkowite lub częściowe wycięcie, odrost guza, wskaźnik sprawności Karnofsky'ego i cecha histopatologiczna, taka jak: martwica) .

Próbki tkanki utrwalone w formalinie i zatopione w parafinie około sześćdziesięciu jeden przypadków GBM i pobliskiej pozornie normalnej tkanki mózgowej zostaną pobrane z prywatnego laboratorium.

Rozpoznanie histologiczne skrawków barwionych H&E zostanie poddane przeglądowi i ocenione zostaną histologiczne kryteria prognostyczne.

Barwienie immunohistochemiczne dla PDL-1, CD8 i LC3B przy użyciu mysich przeciwciał monoklonalnych z barwieniem immunoperoksydazą zostanie użyte jako metoda wizualizacji. Rozcieńczenia przeciwciał, metody odzyskiwania antygenów i czas inkubacji będą przeprowadzane zgodnie z instrukcjami producenta.

Obliczenie wielkości próbki przeprowadzono przy użyciu oprogramowania G*Power 3. Obliczona próbka 61 pacjentów z glejakiem będzie potrzebna do wykrycia wielkości efektu 0,1 (HR w zakresie od 1,54 do 1,74 w wieloczynnikowej regresji proporcji hazardu Coxa dla poziomu ekspresji PD-L1), z prawdopodobieństwem błędu 0,05 i 80% mocy w teście jednostronnym.

Korelacja między liczbą PD-L1, CTL i ekspresją LC3B a kryteriami prognostycznymi GBM zostanie przeprowadzona przy użyciu programu komputerowego SPSS (Pakiet Statystyczny dla Nauk Społecznych).