Valutazione immunoistochimica del ligando della morte programmata1 e LC3B in GBM

I gliomi rappresentano quasi il 30% di tutti i tumori cerebrali primari e sono responsabili della maggior parte dei decessi per tumori cerebrali primari.

Il glioblastoma è il tumore cerebrale maligno primario più comune negli adulti, rappresentando il 60-70% dei gliomi e il 15% dei tumori cerebrali primari. Il glioblastoma è il tipo più aggressivo e indifferenziato di glioma ed è classificato dall'OMS di Grado IV.

La morte cellulare programmata 1 (PD-1) è un recettore proteico che funge da checkpoint immunitario. Trasmette un segnale inibitorio alle cellule T. Nel cancro, protegge i tumori dai linfociti T citotossici (CTL). L'interazione di PD1 con il suo ligando PD-L1 sulla superficie delle cellule T sopprime la loro funzione e ostacola il riconoscimento delle cellule tumorali. L'espressione di PD-L1 è inversamente correlata con la densità delle cellule T intratumorali CD8+ (cluster di differenziazione 8) .

L'autofagia è un processo catabolico che porta alla degradazione cellulare e al riciclaggio mediante la digestione lisosomiale. Permettendo così alle cellule di adattarsi allo stress). L'autofagia promuove lo sviluppo del tumore, la progressione e la resistenza alla terapia grazie al suo ruolo pro-sopravvivenza sotto stress come radiazioni e chemioterapia. LC3B (catena leggera proteica associata ai microtubuli 3 B) è un marker comunemente usato per monitorare l'autofagia. PD-L1 è stato correlato all'autofagia. Recenti scoperte di esperimenti con cellule di melanoma murino e cellule di carcinoma ovarico umano hanno indicato che le cellule che esprimono alti livelli di PD-L1 sono più sensibili agli inibitori dell'autofagia rispetto alle cellule che esprimono debolmente PD-L1. Questa scoperta offre potenziali opportunità per l'utilizzo di inibitori dell'autofagia nelle cellule che sovraesprimono PD-L1 come nuova strada nella gestione del cancro . Quindi non studiato prima in GBM, il nostro studio è un puro studio del romanzo.

Gli autori ipotizzano che sia PD-L1 che LC3B siano altamente espressi nelle cellule GBM e che un'elevata espressione di PDL1 sia associata a un basso numero di CTL . È possibile che livelli elevati di marcatori PD-L1 e LC3B indichino inibizione immunitaria, aumento dell'autofagia e prognosi sfavorevole, pertanto la loro inibizione avrà benefici terapeutici.

Ad oggi e per quanto ne sappiamo, questa ipotesi non è stata pienamente verificata soprattutto sulla nostra località. Per esplorare la nostra ipotesi, questo lavoro è organizzato in tre obiettivi specifici:

1. Per valutare la relazione tra l'espressione PD-L1 e il conteggio CTL in GBM.
2. Valutare l'espressione di PDL-1 e LC3B in GBM e valutare la loro relazione.
3. Esplorare la rilevanza prognostica di PDL-1 e LC3B nel GBM mettendo in relazione il livello della loro espressione con alcuni fattori prognostici stabiliti (età del paziente, tumore multifocale, escissione totale o subtotale, ricrescita del tumore, punteggio di performance di Karnofsky e caratteristiche istopatologiche come: necrosi) .

Campioni di tessuto fissati in formalina e inclusi in paraffina di circa sessantuno casi di GBM e vicino tessuto cerebrale apparentemente normale saranno ottenuti da un laboratorio privato.

Verrà rivista la diagnosi istologica delle sezioni colorate con H&E e verranno valutati i criteri prognostici istologici.

La colorazione immunoistochimica per PDL-1, CD8 e LC3B utilizzando anticorpi monoclonali di topo con colorazione con immunoperossidasi verrà utilizzata come metodo di visualizzazione. Le diluizioni degli anticorpi, i metodi di recupero dell'antigene e il tempo di incubazione saranno tutti condotti secondo le istruzioni del produttore.

Il calcolo della dimensione del campione è stato effettuato utilizzando il software G*Power 3 . Sarà necessario un campione calcolato di 61 pazienti con glioblastoma per rilevare una dimensione dell'effetto di 0,1 (HR compresa tra 1,54 e 1,74 nella regressione multivariata della proporzione di rischio di Cox per il livello di espressione di PD-L1), con una probabilità di errore di 0,05 e 80% di potenza su un test a una coda.

La correlazione tra PD-L1, conteggio CTL ed espressione di LC3B ei criteri prognostici di GBM saranno eseguiti utilizzando un software informatico SPSS (Statistical Package for Social Sciences).