Ohjelmoidun kuoleman ligandin1 ja LC3B:n immunohistokemiallinen arviointi GBM:ssä

Glioomat muodostavat lähes 30 prosenttia kaikista primaarisista aivokasvaimista, ja ne ovat vastuussa suurimmasta osasta primaaristen aivokasvainten aiheuttamista kuolemista.

Glioblastooma on yleisin primaarinen pahanlaatuinen aivokasvain aikuisilla, ja se muodostaa 60-70 % glioomista ja 15 % primaarisista aivokasvaimista. Glioblastooma on aggressiivisin ja erottumattomin gliooman tyyppi, ja se on luokiteltu WHO:n luokkaan IV.

Ohjelmoitu solukuolema 1 (PD-1) on proteiinireseptori, joka toimii immuunijärjestelmän tarkistuspisteenä. Se välittää estävän signaalin T-soluille. Syövässä se suojaa kasvaimia sytotoksisilta T-lymfosyyteiltä (CTL). PD1:n vuorovaikutus ligandinsa PD-L1:n kanssa T-solujen pinnalla suppressoi niiden toimintaa ja estää kasvainsolujen tunnistamisen. PD-L1:n ilmentyminen korreloi käänteisesti kasvaimensisäisten CD8+ (Differentiaatioryhmä 8) T-solujen tiheyden kanssa. .

Autofagia on katabolinen prosessi, joka johtaa solujen hajoamiseen ja kierrätykseen lysosomaalisen ruoansulatuksen kautta. Näin solut voivat sopeutua stressiin). Autofagia edistää kasvaimen kehittymistä, etenemistä ja hoitoresistenssiä johtuen sen selviytymistä edistävästä roolista stressin alaisena säteilynä ja kemoterapiana. LC3B (mikrotubuluksiin liittyvä proteiinin kevytketju 3 B) on yleisesti käytetty markkeri autofagian seuraamiseen. PD-L1 on liittynyt autofagiaan. Hiiren melanoomasoluilla ja ihmisen munasarjasyöpäsoluilla tehdyistä kokeista saadut viimeaikaiset havainnot osoittivat, että korkeita PD-L1-tasoja ilmentävät solut ovat herkempiä autofagian estäjille kuin solut, jotka ilmentävät heikosti PD-L1:tä. Tämä havainto tarjoaa potentiaalisia mahdollisuuksia käyttää autofagian estäjiä PD-L1:tä yli-ilmentävissä soluissa uutena keinona syövän hoidossa. Ei siis aiemmin tutkittu GBM:ssä, tutkimuksemme on puhdas uusi tutkimus.

Kirjoittajat olettavat, että sekä PD-L1 että LC3B ilmentyvät voimakkaasti GBM-soluissa ja korkea PDL1-ilmentyminen liittyy alhaiseen CTL-määrään. On mahdollista, että PD-L1- ja LC3B-markkerien kohonneet tasot osoittavat immuuni-inhibitiota, lisääntynyttä autofagiaa ja huonoa ennustetta, joten niiden estämisellä on terapeuttista hyötyä.

Tähän mennessä ja parhaan tietomme mukaan tätä hypoteesia ei ole täysin testattu etenkään paikkakunnallamme. Hypoteesimme tutkimiseksi tämä työ on jaettu kolmeen erityiseen tavoitteeseen:

1. Arvioida PD-L1:n ilmentymisen ja CTL-määrän välistä suhdetta GBM:ssä.
2. Arvioida PDL-1:n ja LC3B:n ilmentymistä GBM:ssä ja arvioida niiden suhdetta.
3. Tutkia PDL-1:n ja LC3B:n prognostista merkitystä GBM:ssä vertaamalla niiden ilmentymistasoa joihinkin todettuihin prognostisiin tekijöihin (potilaan ikä, multifokaalinen kasvain, kokonais- tai välileikkaus, kasvaimen uudelleenkasvu, karnofskyn suorituskykypisteet ja histopatologinen piirre, kuten: nekroosi) .

Formaliinikiinnitetyt-parafiiniin upotetut kudosnäytteet noin 61 GBM-tapauksesta ja lähellä olevasta näennäisesti normaalista aivokudoksesta saadaan yksityisestä laboratoriosta.

H&E-värjäysleikkeiden histologinen diagnoosi tarkistetaan ja histologiset prognostiset kriteerit arvioidaan.

Visualisointimenetelmänä käytetään immunohistokemiallista värjäystä PDL-1:lle, CD8:lle ja LC3B:lle käyttämällä hiiren monoklonaalisia vasta-aineita immunoperoksidaasivärjäyksellä. Vasta-aineiden laimennos, antigeenin hakumenetelmät ja inkubaatioaika suoritetaan kaikki valmistajan ohjeiden mukaisesti.

Otoskoon laskeminen suoritettiin G*Power 3 -ohjelmistolla. Laskettu näyte 61 glioblastoomapotilaasta tarvitaan havaitsemaan vaikutuskoko 0,1 (HR vaihteli välillä 1,54 ja 1,74 monimuuttuja Cox Hazard Proportion Regression -regressiossa PD-L1-ilmentymistasolle) virhetodennäköisyydellä 0,05 ja 80 %:n teholla. yksipuolisessa testissä.

PD-L1:n, CTL-määrän ja LC3B:n ilmentymisen välinen korrelaatio ja GBM:n ennustekriteerit suoritetaan käyttämällä tietokoneohjelmistoa SPSS (Statistical Package for Social Sciences).