Évaluation immunohistochimique de la mort programmée ligand1 et LC3B dans le GBM

Les gliomes représentent près de 30 % de toutes les tumeurs cérébrales primaires et sont responsables de la majorité des décès dus aux tumeurs cérébrales primaires .

Le glioblastome est la tumeur cérébrale maligne primitive la plus fréquente chez l'adulte, représentant 60 à 70 % des gliomes et 15 % des tumeurs cérébrales primitives. Le glioblastome est le type de gliome le plus agressif et le plus indifférencié et désigné par l'OMS de grade IV.

La mort cellulaire programmée 1 (PD-1) est un récepteur protéique qui fonctionne comme un point de contrôle immunitaire. Il transmet un signal inhibiteur aux lymphocytes T. Dans le cancer, il protège les tumeurs des lymphocytes T cytotoxiques (CTL) . L'interaction de PD1 avec son ligand PD-L1 à la surface des cellules T supprime leur fonction et entrave la reconnaissance des cellules tumorales. L'expression de PD-L1 est inversement corrélée à la densité de cellules T intratumorales CD8 + (Cluster de différenciation 8) .

L'autophagie est un processus catabolique qui conduit à la dégradation cellulaire et au recyclage par digestion lysosomale. Permettant ainsi aux cellules de s'adapter au stress). L'autophagie favorise le développement, la progression et la résistance à la thérapie de la tumeur en raison de son rôle pro-survie sous stress comme la radiothérapie et la chimiothérapie. LC3B (chaîne légère de protéine associée aux microtubules 3 B) est un marqueur couramment utilisé pour surveiller l'autophagie. PD-L1 a été lié à l'autophagie. Les découvertes récentes d'expériences avec des cellules de mélanome murin et des cellules cancéreuses ovariennes humaines ont indiqué que les cellules exprimant des niveaux élevés de PD-L1 sont plus sensibles aux inhibiteurs de l'autophagie que les cellules qui expriment faiblement PD-L1. Cette découverte offre des opportunités potentielles pour l'utilisation d'inhibiteurs de l'autophagie dans les cellules surexprimant PD-L1 comme une nouvelle voie dans la gestion du cancer. Donc non étudiée dans GBM auparavant, notre étude est une pure étude nouvelle.

Les auteurs émettent l'hypothèse que PD-L1 et LC3B sont fortement exprimés dans les cellules GBM et qu'une expression élevée de PDL1 est associée à un faible nombre de CTL . Il est possible que des niveaux élevés de marqueurs PD-L1 et LC3B indiquent une inhibition immunitaire, une autophagie accrue et un mauvais pronostic, ainsi leur inhibition aura un bénéfice thérapeutique.

A ce jour et à notre connaissance, cette hypothèse n'a pas été pleinement testée notamment sur notre localité. Pour explorer notre hypothèse, ce travail est organisé en trois objectifs spécifiques :

1. Évaluer la relation entre l'expression de PD-L1 et le nombre de CTL dans le GBM.
2. Évaluer l'expression de PDL-1 et LC3B dans GBM et évaluer leur relation.
3. Explorer la pertinence pronostique de PDL-1 et LC3B dans le GBM en reliant le niveau de leur expression à certains facteurs pronostiques établis (âge du patient, tumeur multifocale, excision totale ou sous-totale, repousse tumorale, score de performance de Karnofsky et caractéristique histopathologique telle que : nécrose) .

Des échantillons de tissus fixés au formol et inclus en paraffine d'environ soixante et un cas de GBM et de tissus cérébraux apparemment normaux à proximité seront obtenus auprès d'un laboratoire privé.

Le diagnostic histologique des coupes colorées H&E sera revu et les critères pronostiques histologiques seront évalués.

La coloration immunohistochimique pour PDL-1, CD8 et LC3B à l'aide d'anticorps monoclonaux de souris avec coloration à l'immunoperoxydase sera utilisée comme méthode de visualisation. Les dilutions d'anticorps, les méthodes de récupération d'antigène et le temps d'incubation seront tous effectués conformément aux instructions du fabricant.

Le calcul de la taille de l'échantillon a été effectué à l'aide du logiciel G*Power 3. Un échantillon calculé de 61 patients atteints de glioblastome sera nécessaire pour détecter une taille d'effet de 0,1 (HR compris entre 1,54 et 1,74 dans la régression multivariée de la proportion de risque de Cox pour le niveau d'expression PD-L1), avec une probabilité d'erreur de 0,05 et 80 % de puissance sur un test unilatéral.

La corrélation entre PD-L1, le nombre de CTL et l'expression de LC3B et les critères pronostiques du GBM seront effectués à l'aide d'un logiciel informatique SPSS (Statistical Package for Social Sciences).