オピオイド拮抗薬ナルトレキソンによるアトピー性皮膚炎の慢性かゆみの治療

具体的な目的:

A1 吸引水疱を使用してさまざまな概日段階で表皮を収集することにより、概日リズムの観点からかゆみの重症度の根底にあるメカニズムを評価します。 これは、慢性的なかゆみのあるAD患者に行われます。 細胞は吸引水ぶくれの一部から分離され、RNA を分離および配列決定するために使用され、さまざまな時点で AD 患者の症候性および非症候性領域から採取された吸引水疱内の異なるタンパク質および RNA 発現を評価および比較します。 研究者は、その後、かゆみの重症度の症状をクロック遺伝子とオピオイド受容体のレベル、および RNA 発現の差異パターンと関連付けます。 A1は研究アームAによって評価され、この研究の結果は、治療/機構研究（アームBおよびC）のために吸引水ぶくれを採取する時点を決定するのに役立ちます。

A2 慢性のかゆみにおけるオピオイド受容体の機構的役割と治療効果を調べます。 この目的のために、クロスオーバーのプラセボ対照デザインを使用して、既存の試験を拡張することにより、オピオイド受容体拮抗薬（ナルトレキソン）を使用している患者を治療します。 治験責任医師は、プラセボまたはナルトレキソン治療を受けているAD患者の症候性および非症候性領域からの吸引水疱によって採取された表皮の差異タンパク質およびRNA発現を収集、評価、定量化および比較します。 トランスクリプトーム解析は、神経炎症および神経マーカー (サイトカイン、GPCR、およびオピオイド受容体を含む) の解析に焦点を当てますが、これらに限定されません。 確認は、生検の in-situ ハイブリダイゼーションを使用して、特定の細胞の種類と位置、および in vitro 培養の qPCR 発現を関連付けることで行われます。 蛍光標識オピオイドリガンドとインターナリゼーションパターンを用いた結合研究が行われます。

A3 神経-ケラチノサイト相互作用によるオピオイド系の根底にあるメカニズムと、皮膚から神経へのかゆみの伝達に対する可能性のある影響を、in vitro ニューロン-ケラチノサイト共培養モデルを使用してテストします。 さらに、研究者は、この in vitro モデルを使用して A2 に見られるかゆみを引き起こすネットワークと経路を検証することを計画しており、外部刺激 (例えば、 異なるオピオイド暴露条件下でケラチノサイトと神経細胞体に光、または機械的刺激）。 FC由来の感覚ニューロンは、異なる患者KCと共培養されます。 研究者は、Fluo-4 AM カルシウム イメージングと電気生理学によって、KC の反応パターンと、接続された末梢感覚ニューロンへの信号の伝達をテストします。 サンダロアがこれらの望ましいカルシウムフラックスを誘導することを研究者が以前に発表したように、反応は匂い物質サンダロアに応答します。

RNA ターゲットの CRISPR ノックアウト、オピオイドの人身売買、カルシウム イメージングおよび電気生理学を用いた細胞の qPCR および機能アッセイで発現パターンを確認することにより、in vitro 上皮/神経モデルを適用して、臨床試験におけるエピジェネティック解析によって特定された可能性のあるかゆみ経路を検証します。 最後に、機能研究を行うために、ヒト皮膚と iPS 由来のヒト末梢ニューロンとの間の共培養をさらに開発します。