Behandlung von chronischem Juckreiz bei atopischer Dermatitis mit dem Opioid-Antagonisten Naltrexon

Spezifische Ziele:

A1 Bewerten Sie den zugrunde liegenden Mechanismus der Schwere des Juckreizes in Bezug auf den zirkadianen Rhythmus, indem Sie Epidermis in verschiedenen zirkadianen Stadien mithilfe von Saugblasen sammeln. Dies wird bei AD-Patienten mit chronischem Juckreiz durchgeführt. Die Zellen werden aus einem Teil der Saugblasen isoliert und zur Isolierung und Sequenzierung von RNA verwendet, um die unterschiedliche Protein- und RNA-Expression in Saugblasen zu bewerten und zu vergleichen, die aus symptomatischen und nicht symptomatischen Bereichen bei Patienten mit AD zu verschiedenen Zeitpunkten entnommen wurden. Die Ermittler korrelieren dann die Juckreizschweresymptome mit Uhrengen- und Opioidrezeptorspiegeln und RNA-Expressionsdifferenzmustern. A1 wird von Studienarm A ausgewertet und die Ergebnisse dieser Studie dienen der Entscheidung über den Zeitpunkt der Saugblasenentnahme für die therapeutischen/mechanistischen Studien (Arm B und C).

A2 Untersuchen Sie die mechanistische Rolle und therapeutische Wirksamkeit von Opioidrezeptoren bei chronischem Juckreiz. Zu diesem Zweck wird ein Placebo-kontrolliertes Cross-Over-Design zur Behandlung von Patienten mit Opioid-Rezeptor-Antagonisten (Naltrexon) verwendet, indem unsere bestehende Studie erweitert wird. Die Forscher werden die unterschiedliche Protein- und RNA-Expression in der Epidermis, die durch Saugblasen aus symptomatischen und nicht symptomatischen Bereichen bei Patienten mit AD unter Placebo- oder Naltrexon-Behandlung entnommen wurde, sammeln, bewerten, quantifizieren und vergleichen. Die Transkriptomanalyse wird sich auf die Analyse von neuroinflammatorischen und neuronalen Markern (einschließlich Zytokinen, GPCR und Opioidrezeptoren) konzentrieren, ist aber nicht darauf beschränkt. Die Bestätigung erfolgt durch In-situ-Hybridisierung von Biopsien, um den spezifischen Zelltyp und -ort und die qPCR-Expression von In-vitro-Kulturen zu korrelieren. Die Bindungsstudien mit fluoreszenzmarkierten Opioidliganden und Internalisierungsmustern werden durchgeführt.

A3 Testen Sie die zugrunde liegenden Mechanismen des Opioidsystems mit der Nerven-Keratinozyten-Interaktion und mögliche Auswirkungen auf die Übertragung von Juckreiz von der Haut auf die Nerven, indem Sie ein In-vitro-Neuron-Keratinozyten-Kokulturmodell verwenden. Darüber hinaus planen die Forscher, Juckreiz verursachende Netzwerke und Wege, die in A2 gefunden wurden, mit diesem In-vitro-Modell zu validieren, und werden in der Lage sein, Änderungen der Kalziumflussschwelle nach Exposition gegenüber externen Stimuli (z. Licht oder mechanische Reize) auf Keratinozyten und neuronale Somata unter verschiedenen Opioid-Expositionsbedingungen. Die FC-abgeleiteten sensorischen Neuronen werden mit unterschiedlichen Patienten-KC co-kultiviert. Die Forscher werden das Reaktionsmuster von KC und die Übertragung des Signals an verbundene periphere sensorische Neuronen durch Fluo-4 AM Calcium-Bildgebung und Elektrophysiologie testen. Die Reaktion wird auf den Geruchsstoff Sandalore ansprechen, da die Forscher zuvor veröffentlicht haben, dass Sandalore diese gewünschten Calciumflüsse induziert.

Wenden Sie das In-vitro-Epithel-/Nervenmodell an, um mögliche Juckreizpfade zu validieren, die durch epigenetische Analyse in den klinischen Studien identifiziert wurden, indem Sie das Expressionsmuster mit qPCR und funktionellen Assays an Zellen mit CRISPR-Knockout der RNA-Ziele, Opioidhandel, Kalziumbildgebung und Elektrophysiologie bestätigen. Schließlich entwickeln Sie Co-Kulturen zwischen menschlicher Haut und iPS-abgeleiteten menschlichen peripheren Neuronen weiter, um funktionelle Studien durchzuführen.