Behandling av kronisk kløe ved atopisk dermatitt med opioidantagonist naltrekson

Spesifikke mål:

A1 Evaluer den underliggende mekanismen for alvorlighetsgrad av kløe i form av døgnrytme ved å samle opp epidermis på forskjellige døgnstadier ved å bruke sugeblemmer. Dette vil bli gjort hos AD-pasienter med kronisk kløe. Cellene vil bli isolert fra deler av sugeblærene og brukt til å isolere og sekvensere RNA for å evaluere og sammenligne differensialprotein- og RNA-ekspresjonen i sugeblister tatt fra symptomatiske og ikke-symptomatiske områder hos pasienter med AD på forskjellige tidspunkt. Etterforskerne vil deretter korrelere symptomene på kløens alvorlighetsgrad til klokkegen- og opioidreseptornivåer og RNA-ekspresjonsdifferensialmønster. A1 vil bli evaluert av studiearm A og resultatene fra denne studien vil tjene til å bestemme tidspunktet for å ta sugeblærene for de terapeutiske/mekanistiske studiene (arm B og C).

A2 Undersøke den mekanistiske rollen og den terapeutiske effekten til opioidreseptorer ved kronisk kløe. For dette formålet vil en cross-over, placebokontrollert design bli brukt til å behandle pasienter med opioidreseptorantagonist (Naltrexone) ved å utvide vår eksisterende studie. Etterforskerne vil samle inn, evaluere, kvantifisere og sammenligne differensialprotein- og RNA-ekspresjonen i epidermis tatt av sugeblærer fra symptomatiske og ikke-symptomatiske områder hos pasienter med AD på placebo- eller naltreksonbehandling. Transkriptomanalyse vil være fokusert, men ikke begrenset til, analyse av nevroinflammatoriske og nevronale markører (inkludert cytokiner, GPCR og opioidreseptorer). Bekreftelse vil skje ved bruk av in-situ hybridisering av biopsier for å korrelere spesifikk celletype og plassering og qPCR-ekspresjon av in vitro-kulturer. Bindingsstudiene ved bruk av fluorescerende merkede opioidligander og internaliseringsmønster vil bli utført.

A3 Test de underliggende mekanismene til opioidsystemet med nerve-keratinocytt-interaksjon og mulige effekter på kløeoverføring fra hud til nerver ved å bruke en in vitro-nevron-keratinocytt-kokulturmodell. Videre planlegger etterforskerne å validere kløefremkallende nettverk og veier funnet i A2 ved å bruke denne in vitro-modellen og vil være i stand til å evaluere endringer i kalsiumfluksgrense etter eksponering for eksterne stimuli (f. lys eller mekanisk stimuli) på keratinocytter og nevronale somata under forskjellige opioideksponeringsforhold. De FC-avledede sensoriske nevronene vil bli dyrket sammen med forskjellige pasient-KC. Etterforskerne vil teste reaksjonsmønsteret til KC og overføring av signalet til tilkoblede perifere sensoriske nevroner ved hjelp av Fluo-4 AM Calcium imaging og elektrofysiologi. Reaksjonen vil svare på luktstoffet Sandalore, ettersom etterforskerne tidligere har publisert at Sandalore induserer disse ønskede kalsiumfluksene.

Bruk in vitro-epitel-/nervemodellen for å validere mulige kløeveier identifisert ved epigenetisk analyse i de kliniske forsøkene ved å bekrefte ekspresjonsmønsteret med qPCR og funksjonelle analyser på celler med CRISPR-knockout av RNA-målene, opioidhandel, kalsiumavbildning og elektrofysiologi. Til slutt, videreutvikle samkulturer mellom menneskelig hud og iPS-avledede menneskelige perifere nevroner for å utføre funksjonelle studier.