Krónikus viszketés kezelése atópiás dermatitiszben opioid antagonista naltrexonnal

Konkrét célok:

A1 Értékelje a viszketés súlyosságának mögöttes mechanizmusát a cirkadián ritmus szempontjából az epidermisz különböző cirkadián szakaszokban történő összegyűjtésével szívóhólyagok segítségével. Ezt krónikus viszketésben szenvedő AD-betegeknél fogják elvégezni. A sejteket a szívóhólyagok egy részéből izolálják, és RNS izolálására és szekvenálására használják fel, hogy értékeljék és összehasonlítsák a differenciált fehérje- és RNS-expressziót a különböző időpontokban AD-ban szenvedő betegek tüneti és nem tünetmentes területeiről vett szívóhólyagokban. A kutatók ezután összefüggésbe hozzák a viszketés súlyossági tüneteit az óragén- és opioidreceptor-szinttel, valamint az RNS-expressziós eltérési mintázattal. Az A1-et az A vizsgálati ág fogja értékelni, és ennek a vizsgálatnak az eredményei szolgálják majd a terápiás/mechanisztikus vizsgálatok (B és C kar) szívóhólyagok felvételének időpontját.

A2 Az opioid receptorok mechanikai szerepének és terápiás hatékonyságának vizsgálata krónikus viszketésben. Ebből a célból egy keresztezett, placebo-kontrollos elrendezést alkalmazunk az opioid receptor antagonistával (naltrexonnal) szenvedő betegek kezelésére a meglévő vizsgálatunk kiterjesztésével. A vizsgálók összegyűjtik, értékelik, számszerűsítik és összehasonlítják a differenciált fehérje- és RNS-expressziót az epidermiszben, amelyet a tünetekkel járó és nem tünetmentes területekről felszívott hólyagok vettek fel a placebóval vagy naltrexonnal kezelt AD-ben szenvedő betegeknél. A transzkriptomanalízis a neuroinflammatorikus és neuronális markerek (beleértve a citokineket, GPCR-t és opioid receptorokat) elemzésére összpontosít, de nem kizárólagosan. A megerősítés a biopsziák in situ hibridizációjával történik az adott sejttípus és -hely, valamint az in vitro tenyészetek qPCR expressziójának korrelációja érdekében. A kötődési vizsgálatokat fluoreszcensen jelölt opioid ligandumok és internalizációs minta felhasználásával végezzük.

A3 Tesztelje az opioid rendszer mögött meghúzódó mechanizmusokat ideg-keratinocita kölcsönhatásokkal és a viszketés bőrről idegre történő átvitelére gyakorolt ​​lehetséges hatásokat egy in vitro neuron-keratinocita ko-kultúra modell segítségével. Ezenkívül a kutatók azt tervezik, hogy az A2-ben talált viszketést okozó hálózatokat és útvonalakat validálják ezzel az in vitro modellel, és képesek lesznek értékelni a kalciumfluxus küszöbértékének változásait külső ingereknek (pl. fény vagy mechanikus ingerek) keratinocitákra és neuronális szomákra különböző opioid expozíciós körülmények között. Az FC-ből származó szenzoros neuronokat különböző betegek KC-vel együtt tenyésztik. A kutatók Fluo-4 AM kalcium képalkotással és elektrofiziológiával tesztelik a KC reakciómintázatát és a jelek átvitelét a kapcsolódó perifériás szenzoros neuronokhoz. A reakció a Sandalore illatanyagra reagál, mivel a kutatók korábban közzétették, hogy a Sandalore indukálja ezeket a kívánt kalciumáramlásokat.

Alkalmazza az in vitro epiteliális/idegmodellt az epigenetikai elemzéssel azonosított lehetséges viszketési útvonalak validálására a klinikai vizsgálatok során, az expressziós mintázat qPCR-rel történő megerősítésével és funkcionális vizsgálatokkal olyan sejteken, amelyeknél az RNS-célpontok CRISPR-kiütése, opioid-kereskedelem, kalcium-képalkotás és elektrofiziológia. Végül az emberi bőr és az iPS-eredetű humán perifériás neuronok közötti ko-kultúrák továbbfejlesztése funkcionális vizsgálatok elvégzése érdekében.