Behandeling van chronische jeuk bij atopische dermatitis met opioïde-antagonist naltrexon

Specifieke doelen:

A1 Evalueer het onderliggende mechanisme van de ernst van de jeuk in termen van circadiaans ritme door epidermis in verschillende circadiane stadia te verzamelen met behulp van zuigblaasjes. Dit zal worden gedaan bij AD-patiënten met chronische jeuk. De cellen zullen worden geïsoleerd uit een deel van de zuigblisters en worden gebruikt om RNA te isoleren en te sequensen om de differentiële eiwit- en RNA-expressie in de zuigblister te evalueren en te vergelijken, genomen uit symptomatische en niet-symptomatische gebieden bij patiënten met AD op verschillende tijdstippen. De onderzoekers zullen vervolgens de ernst van de jeuksymptomen correleren met de klokgen- en opioïdereceptorniveaus en het differentiële patroon van RNA-expressie. A1 zal worden geëvalueerd door studiearm A en de resultaten van deze studie zullen dienen om te beslissen over het tijdstip waarop de zuigblisters worden afgenomen voor de therapeutische/mechanische onderzoeken (arm B en C).

A2 Onderzoek naar de mechanistische rol en therapeutische werkzaamheid van opioïdreceptoren bij chronische jeuk. Voor dit doel zal een cross-over, placebo-gecontroleerd ontwerp worden gebruikt om patiënten met opioïde receptorantagonisten (Naltrexon) te behandelen door onze bestaande studie uit te breiden. De onderzoekers zullen de differentiële eiwit- en RNA-expressie in de epidermis verzamelen, evalueren, kwantificeren en vergelijken, genomen door zuigblaren uit symptomatische en niet-symptomatische gebieden bij patiënten met AD op Placebo- of Naltrexon-behandeling. Transcriptoomanalyse zal gericht zijn op, maar niet beperkt tot, analyse van neuro-inflammatoire en neuronale markers (inclusief cytokines, GPCR en opioïde receptoren). Bevestiging zal plaatsvinden met behulp van in-situ hybridisatie van biopsieën om specifiek celtype en locatie en qPCR-expressie van in vitro culturen te correleren. De bindingsstudies met behulp van fluorescerend gelabelde opioïde liganden en internalisatiepatronen zullen worden uitgevoerd.

A3 Test de onderliggende mechanismen van het opioïde systeem met zenuw-keratinocyt interactie en mogelijke effecten op jeuktransductie van huid naar zenuwen door gebruik te maken van een in vitro neuron-keratinocyt co-cultuurmodel. Bovendien zijn de onderzoekers van plan om met behulp van dit in vitro model jeukveroorzakende netwerken en routes die in A2 worden gevonden te valideren en zullen ze in staat zijn veranderingen in de calciumfluxdrempel te evalueren na blootstelling aan externe stimuli (bijv. licht of mechanische prikkels) op keratinocyten en neuronale somata onder verschillende opioïde blootstellingsomstandigheden. De FC-afgeleide sensorische neuronen zullen samen met verschillende KC-patiënten worden gekweekt. De onderzoekers zullen het reactiepatroon van KC en de overdracht van het signaal naar verbonden perifere sensorische neuronen testen door middel van Fluo-4 AM Calcium-beeldvorming en elektrofysiologie. De reactie zal reageren op de geurstof Sandalore, aangezien de onderzoekers eerder hebben gepubliceerd dat Sandalore deze gewenste calciumfluxen induceert.

Pas het in vitro epitheliale/zenuwmodel toe om mogelijke jeukroutes te valideren die zijn geïdentificeerd door epigenetische analyse in de klinische onderzoeken door het expressiepatroon te bevestigen met qPCR en functionele assays op cellen met CRISPR knock-out van de RNA-doelen, opioïde handel, calciumbeeldvorming en elektrofysiologie. Ten slotte, co-culturen tussen menselijke huid en iPS-afgeleide menselijke perifere neuronen verder ontwikkelen om functionele studies uit te voeren.