Behandling av kronisk klåda vid atopisk dermatit med opioidantagonist Naltrexon

Specifika mål:

A1 Utvärdera den underliggande mekanismen för klådans svårighetsgrad i termer av dygnsrytm genom att samla upp epidermis vid olika dygnsstadier med hjälp av sugblåsor. Detta kommer att göras hos AD-patienter med kronisk klåda. Cellerna kommer att isoleras från en del av sugblåsorna och användas för att isolera och sekvensera RNA för att utvärdera och jämföra det differentiella protein- och RNA-uttrycket i sugblåsorna från symtomatiska och icke-symptomatiska områden hos patienter med AD vid olika tidpunkter. Utredarna kommer sedan att korrelera symptomen på klådans svårighetsgrad till klockgen- och opioidreceptornivåer och RNA-uttrycksskillnadsmönster. A1 kommer att utvärderas av studiearm A och resultaten från denna studie kommer att användas för att bestämma tidpunkten för att ta sugblåsorna för de terapeutiska/mekanistiska studierna (arm B och C).

A2 Undersöka den mekanistiska rollen och den terapeutiska effekten av opioidreceptorer vid kronisk klåda. För detta ändamål kommer en cross-over, placebokontrollerad design att användas för att behandla patienter med opioidreceptorantagonist (Naltrexone) genom att utöka vår befintliga studie. Utredarna kommer att samla in, utvärdera, kvantifiera och jämföra det differentiella protein- och RNA-uttrycket i epidermis som tagits av sugblåsor från symtomatiska och icke-symptomatiska områden hos patienter med AD som behandlas med placebo eller Naltrexon. Transkriptomanalys kommer att vara fokuserad, men inte begränsad till, analys av neuroinflammatoriska och neuronala markörer (inklusive cytokiner, GPCR och opioidreceptorer). Bekräftelse kommer att ske med användning av in-situ hybridisering av biopsier för att korrelera specifik celltyp och lokalisering och qPCR-uttryck av in vitro-kulturer. Bindningsstudierna med användning av fluorescerande märkta opioidligander och internaliseringsmönster kommer att utföras.

A3 Testa de underliggande mekanismerna för opioidsystemet med nerv-keratinocytinteraktion och möjliga effekter på klådatransduktion från hud till nerver genom att använda en in vitro neuron-keratinocyt-samodlingsmodell. Dessutom planerar utredarna att validera kliande nätverk och vägar som finns i A2 med hjälp av denna in vitro-modell och kommer att kunna utvärdera förändringar av kalciumflödeströskeln efter exponering för yttre stimuli (t. ljus eller mekanisk stimuli) på keratinocyter och neuronala somata under olika opioidexponeringsförhållanden. De FC-härledda sensoriska neuronerna kommer att samodlas med olika patient-KC. Utredarna kommer att testa reaktionsmönstret för KC och överföring av signalen till anslutna perifera sensoriska neuroner genom Fluo-4 AM Calcium imaging och elektrofysiologi. Reaktionen kommer att svara på luktämnet Sandalore, eftersom utredarna tidigare har publicerat att Sandalore inducerar dessa önskade kalciumflöden.

Tillämpa in vitro-epitel-/nervmodellen för att validera möjliga klåda som identifierats genom epigenetisk analys i de kliniska prövningarna genom att bekräfta uttrycksmönstret med qPCR och funktionella analyser på celler med CRISPR-knockout av RNA-målen, opioidhandel, kalciumavbildning och elektrofysiologi. Slutligen, vidareutveckla samkulturer mellan mänsklig hud och iPS-härledda mänskliga perifera neuroner för att utföra funktionella studier.