Traitement des démangeaisons chroniques dans la dermatite atopique avec un antagoniste des opioïdes naltrexone

Objectifs spécifiques :

A1 Évaluer le mécanisme sous-jacent de la sévérité des démangeaisons en termes de rythme circadien en collectant l'épiderme à différents stades circadiens à l'aide de cloques d'aspiration. Cela sera fait chez les patients atteints de la maladie d'Alzheimer avec des démangeaisons chroniques. Les cellules seront isolées d'une partie des cloques d'aspiration et utilisées pour isoler et séquencer l'ARN afin d'évaluer et de comparer l'expression différentielle des protéines et de l'ARN dans les cloques d'aspiration prélevées dans des zones symptomatiques et non symptomatiques chez des patients atteints de MA à différents moments. Les chercheurs établiront ensuite une corrélation entre les symptômes de sévérité des démangeaisons et les niveaux de gènes d'horloge et de récepteurs opioïdes et le schéma différentiel d'expression de l'ARN. A1 sera évalué par le bras A de l'étude et les résultats de cette étude serviront à décider du moment de la prise des cloques d'aspiration pour les études thérapeutiques/mécanistes (bras B et C).

A2 Étudier le rôle mécaniste et l'efficacité thérapeutique des récepteurs opioïdes dans les démangeaisons chroniques. À cette fin, une conception croisée contrôlée par placebo sera utilisée pour traiter les patients avec un antagoniste des récepteurs opioïdes (Naltrexone) en élargissant notre essai existant. Les chercheurs recueilleront, évalueront, quantifieront et compareront l'expression différentielle des protéines et de l'ARN dans l'épiderme prélevé par des cloques d'aspiration dans les zones symptomatiques et non symptomatiques chez les patients atteints de MA sous traitement par placebo ou naltrexone. L'analyse du transcriptome sera axée, mais sans s'y limiter, sur l'analyse des marqueurs neuro-inflammatoires et neuronaux (y compris les cytokines, les GPCR et les récepteurs opioïdes). La confirmation se produira en utilisant l'hybridation in situ des biopsies pour corréler le type et l'emplacement spécifiques des cellules et l'expression qPCR des cultures in vitro. Les études de liaison utilisant des ligands opioïdes marqués par fluorescence et le schéma d'internalisation seront réalisées.

A3 Tester les mécanismes sous-jacents du système opioïde avec l'interaction nerf-kératinocyte et les effets possibles sur la transduction des démangeaisons de la peau vers les nerfs en utilisant un modèle de co-culture neurone-kératinocyte in vitro. De plus, les chercheurs prévoient de valider les réseaux et les voies provoquant des démangeaisons trouvés dans A2 à l'aide de ce modèle in vitro et seront en mesure d'évaluer les changements de seuil de flux de calcium après exposition à des stimuli externes (par ex. stimuli lumineux ou mécaniques) sur les kératinocytes et les somates neuronaux dans différentes conditions d'exposition aux opioïdes. Les neurones sensoriels dérivés de FC seront co-cultivés avec différents patients KC. Les chercheurs testeront le schéma de réaction de KC et la transmission du signal aux neurones sensoriels périphériques connectés par imagerie et électrophysiologie Fluo-4 AM Calcium. La réaction répondra à l'odorant Sandalore, car les chercheurs ont déjà publié que Sandalore induit ces flux de calcium souhaités.

Appliquer le modèle épithélial/nerf in vitro pour valider les voies de démangeaison possibles identifiées par l'analyse épigénétique dans les essais cliniques en confirmant le modèle d'expression avec qPCR et des tests fonctionnels sur des cellules avec CRISPR knock-out des cibles d'ARN, le trafic d'opioïdes, l'imagerie calcique et l'électrophysiologie. Enfin, développer davantage les co-cultures entre la peau humaine et les neurones périphériques humains dérivés d'iPS pour effectuer des études fonctionnelles.