阿片拮抗剂纳曲酮治疗特应性皮炎慢性瘙痒

具体目标：

A1 通过使用吸水泡收集不同昼夜节律阶段的表皮，根据昼夜节律评估瘙痒严重程度的潜在机制。 这将在患有慢性瘙痒的 AD 患者中进行。 细胞将从部分抽吸水泡中分离出来，用于分离和测序 RNA，以评估和比较在不同时间点从 AD 患者的症状和非症状区域采集的抽吸水泡中蛋白质和 RNA 的差异表达。 然后，研究人员会将瘙痒严重程度症状与时钟基因和阿片受体水平以及 RNA 表达差异模式相关联。 A1 将由研究组 A 进行评估，该研究的结果将用于决定为治疗/机械研究（组 B 和 C）进行抽吸水泡的时间点。

A2 研究阿片受体在慢性瘙痒中的机制作用和治疗效果。 为此，将通过扩展我们现有的试验，使用交叉、安慰剂对照设计来治疗阿片受体拮抗剂（纳曲酮）患者。 研究人员将收集、评估、量化和比较接受安慰剂或纳曲酮治疗的 AD 患者有症状和无症状区域抽取的表皮中蛋白质和 RNA 表达的差异。 转录组分析将侧重于但不限于神经炎症和神经元标记物（包括细胞因子、GPCR 和阿片受体）的分析。 确认将使用活组织检查的原位杂交将特定细胞类型和位置与体外培养物的 qPCR 表达相关联。 将使用荧光标记的阿片配体和内化模式进行结合研究。

A3 通过使用体外神经元-角质形成细胞共培养模型，测试阿片类药物系统与神经-角质形成细胞相互作用的潜在机制以及对从皮肤到神经的瘙痒转导的可能影响。 此外，研究人员计划使用这种体外模型验证 A2 中发现的引起瘙痒的网络和通路，并将能够评估暴露于外部刺激（例如，刺激）后钙通量阈值的变化。 在不同的阿片类药物暴露条件下，光或机械刺激）作用于角质形成细胞和神经元胞体。 FC 衍生的感觉神经元将与不同的患者 KC 共同培养。 研究人员将通过 Fluo-4 AM 钙成像和电生理学测试 KC 的反应模式和信号向连接的周围感觉神经元的传输。 该反应将对气味剂 Sandalore 做出反应，因为研究人员之前已经发表，Sandalore 会诱导这些所需的钙通量。

应用体外上皮/神经模型来验证临床试验中表观遗传分析确定的可能的瘙痒途径，方法是通过 qPCR 和 CRISPR 敲除 RNA 靶标、阿片类药物贩运、钙成像和电生理学对细胞进行功能测定来确认表达模式。 最后，进一步开发人类皮肤和 iPS 衍生的人类周围神经元之间的共培养物以进行功能研究。