Лечение хронического зуда при атопическом дерматите опиоидным антагонистом налтрексоном

Конкретные цели:

A1 Оцените основной механизм тяжести зуда с точки зрения циркадного ритма, собирая эпидермис на разных циркадных стадиях с помощью аспирационных пузырей. Это будет сделано у пациентов с АД с хроническим зудом. Клетки будут выделены из части аспирационных пузырей и использованы для выделения и секвенирования РНК для оценки и сравнения дифференциальной экспрессии белка и РНК в аспирационных волдырях, взятых из симптоматических и бессимптомных областей у пациентов с БА в разные моменты времени. Затем исследователи сопоставят симптомы тяжести зуда с уровнями часового гена и опиоидных рецепторов и дифференциальной картиной экспрессии РНК. A1 будет оцениваться исследовательской группой A, и результаты этого исследования будут служить для принятия решения о времени взятия аспирационных блистеров для терапевтических/механистических исследований (группы B и C).

A2 Изучите механистическую роль и терапевтическую эффективность опиоидных рецепторов при хроническом зуде. С этой целью будет использоваться перекрестный плацебо-контролируемый дизайн для лечения пациентов антагонистом опиоидных рецепторов (налтрексон) путем расширения существующего исследования. Исследователи будут собирать, оценивать, количественно определять и сравнивать дифференцированную экспрессию белка и РНК в эпидермисе, взятом с помощью аспирационных пузырей из симптоматических и бессимптомных областей у пациентов с АтД, получавших лечение плацебо или налтрексоном. Анализ транскриптома будет направлен, но не ограничиваться анализом нейровоспалительных и нейрональных маркеров (включая цитокины, GPCR и опиоидные рецепторы). Подтверждение будет происходить с использованием гибридизации биоптатов in situ для корреляции определенного типа и местоположения клеток и экспрессии qPCR культур in vitro. Будут проведены исследования связывания с использованием флуоресцентно меченных опиоидных лигандов и модели интернализации.

A3 Проверьте основные механизмы опиоидной системы с взаимодействием нервов и кератиноцитов и возможное влияние на передачу зуда от кожи к нервам с использованием модели совместной культуры нейронов и кератиноцитов in vitro. Кроме того, исследователи планируют проверить вызывающие зуд сети и пути, обнаруженные в A2, используя эту модель in vitro, и смогут оценить изменения порога потока кальция после воздействия внешних раздражителей (например, световые или механические раздражители) на кератиноциты и соматы нейронов при различных условиях воздействия опиоидов. Сенсорные нейроны, полученные из FC, будут совместно культивироваться с KC разных пациентов. Исследователи проверят характер реакции KC и передачу сигнала на связанные периферические сенсорные нейроны с помощью визуализации кальция Fluo-4 AM и электрофизиологии. Реакция будет реагировать на одорант Sandalore, поскольку исследователи ранее опубликовали, что Sandalore вызывает эти желаемые потоки кальция.

Примените модель эпителия/нерва in vitro, чтобы подтвердить возможные пути развития зуда, выявленные с помощью эпигенетического анализа в клинических испытаниях, путем подтверждения характера экспрессии с помощью количественной ПЦР и функциональных анализов на клетках с нокаутом CRISPR РНК-мишеней, переносом опиоидов, визуализацией кальция и электрофизиологией. Наконец, дальнейшее развитие совместных культур кожи человека и периферических нейронов человека, полученных из iPS, для проведения функциональных исследований.