Kroonisen kutinan hoito atooppisessa ihottumassa opioidiantagonisti naltreksonilla

Erityiset tavoitteet:

A1 Arvioi kutinan vakavuuden taustalla oleva mekanismi vuorokausirytmin suhteen keräämällä orvaskettä eri vuorokausivaiheissa käyttämällä imurakkuloita. Tämä tehdään AD-potilaille, joilla on krooninen kutina. Solut eristetään osasta imurakkuloita ja niitä käytetään RNA:n eristämiseen ja sekvensoimiseen, jotta voidaan arvioida ja vertailla erilaista proteiinin ja RNA:n ilmentymistä imurakkuloissa, jotka on otettu oireellisilta ja ei-oireisilta alueilta potilailla, joilla on AD eri ajankohtina. Tämän jälkeen tutkijat korreloivat kutinan vaikeusoireet kellogeeni- ja opioidireseptoritasoihin ja RNA:n ilmentymiseromalliin. Tutkimusryhmä A arvioi A1:n, ja tämän tutkimuksen tuloksia käytetään päätettäessä ajankohdasta, jolloin imurakkuloita otetaan terapeuttisia/mekanistisia tutkimuksia varten (haarat B ja C).

A2 Tutki opioidireseptorien mekaanista roolia ja terapeuttista tehoa kroonisessa kutinassa. Tätä tarkoitusta varten käytetään ristikkäistä, lumekontrolloitua mallia potilaiden hoitoon opioidireseptorin salpaajalla (naltreksoni) laajentamalla olemassa olevaa tutkimustamme. Tutkijat keräävät, arvioivat, kvantifioivat ja vertaavat proteiini- ja RNA-ilmentymistä orvaskedessä, jotka on otettu imurakkuloista oireellisista ja ei-oireisilta alueilta potilailla, joilla on AD lumelääke- tai naltreksonihoitoa saavilla potilailla. Transkriptioanalyysi keskittyy, mutta ei rajoittuen, hermotulehdus- ja hermosolumarkkereiden (mukaan lukien sytokiinit, GPCR ja opioidireseptorit) analyysiin. Vahvistus tapahtuu käyttämällä biopsioiden in situ -hybridisaatiota spesifisen solutyypin ja sijainnin sekä in vitro -viljelmien qPCR-ilmentymisen korreloimiseksi. Sitoutumistutkimukset, joissa käytetään fluoresoivia leimattuja opioidiligandeja ja internalisaatiomallia, suoritetaan.

A3 Testaa opioidijärjestelmän taustalla olevia mekanismeja hermo-keratinosyyttivuorovaikutuksella ja mahdollisia vaikutuksia kutinan siirtymiseen iholta hermoille käyttämällä in vitro neuroni-keratinosyytti-yhteisviljelymallia. Lisäksi tutkijat aikovat validoida A2:ssa löydetyt kutinaa aiheuttavat verkostot ja reitit tällä in vitro -mallilla ja pystyvät arvioimaan kalsiumvirran kynnysarvon muutoksia ulkoisille ärsykkeille (esim. valoa tai mekaanisia ärsykkeitä) keratinosyytteihin ja hermosoluihin erilaisissa opioidialtistuksen olosuhteissa. FC-peräisiä sensorisia hermosoluja viljellään yhdessä eri potilaan KC:n kanssa. Tutkijat testaavat KC:n reaktiomallia ja signaalin välittymistä yhdistettyihin perifeerisiin aistihermosoluihin Fluo-4 AM -kalsiumkuvauksen ja sähköfysiologian avulla. Reaktio reagoi Sandalore-hajuaineeseen, koska tutkijat ovat aiemmin julkaisseet, että Sandalore indusoi näitä haluttuja kalsiumvirtauksia.

Käytä in vitro epiteeli-/hermomallia validoidaksesi mahdolliset kutinareitit, jotka on tunnistettu epigeneettisellä analyysillä kliinisissä kokeissa vahvistamalla ilmentymismalli qPCR:llä ja funktionaalisilla määrityksillä soluilla, joissa on CRISPR-poistettu RNA-kohteet, opioidikuljetus, kalsiumkuvaus ja elektrofysiologia. Lopuksi kehittää edelleen yhteiskulttuureja ihmisen ihon ja iPS-peräisten ihmisen perifeeristen hermosolujen välillä toiminnallisten tutkimusten suorittamiseksi.