白斑の治療におけるメラノサイトケラチノサイト移植手順の有効性の評価

研究の最初のアームでは、患者の正常に色素沈着している領域が、エピネフリンを含む 1% リドカインで麻酔されました。 外科用ナイフを使用して、研究者は白斑の影響を受けていない表皮の小さな部分を患者の大腿部の小さな領域 (2 cm2) から取り出し、ドナー細胞を取得しました。 外科用ナイフで採取した表皮を乳酸リンゲル液で 3 回洗浄した後、トリプシンを使用して細胞を分離し、細胞を単一の細胞懸濁液に分離しました。 移植されるレシピエント領域は、エルビウム YAG (イットリウム アルミニウム ガーネット) レーザーで焼灼されました。 次に、ドナー領域（太もも）から分離した単一細胞の半分を、参加者が移植に関心のある白斑の影響を受けた領域（5 cm2 領域）に移植しました。

その後、研究者は、写真撮影と VASI (Vitiligo Area Scoring Index) スコアの定量化の両方によって、1 日、1 週間、1 か月、3 か月、および 6 か月の移植領域の治療に対する反応を評価しました。

VASI (Vitiligo Area Scoring Index) は、白斑の関与のパーセンテージであり、手の単位で計算されます。 片手の単位は体表面積の約1%に相当します。

研究の 2 番目のアームでは、研究者は低侵襲手順 (吸引ブリスター移植) を使用して、移植された皮膚とドナー皮膚をサンプリングしました。この方法は、傷跡を誘発することなく真皮から表皮を分離することができます。 大腿上部の正常に色素沈着している領域を、エピネフリンを含む 1% リドカインで麻酔しました。 吸引ブリスター技術を使用して、治験責任医師は患者の大腿部の小さな領域 (4 cm2 または 0.6 インチ cm2) から白斑の影響を受けていない表皮の小さな部分を取り除き、ドナー細胞を取得しました。 採取した表皮を乳酸リンゲル液で 3 回洗浄した後、トリプシンを使用して細胞を分離し、細胞を単一の細胞懸濁液に分離しました。 吸引ブリスター装置を使用して、移植されるレシピエント領域を使用して表皮を採取した。 次に、ドナー領域（太もも）から分離した単一細胞の半分を、患者が移植に関心を持っていた白斑の影響を受けた領域（5 cm2 領域または 0.7 インチ 2）に移植しました。 レシピエント部位からの吸引水ぶくれ皮膚は、同時に単一細胞懸濁液に解離した。 細胞の残りの部分（ドナーとレシピエントの両方から）をフローソーティングにかけ、メラノサイトとケラチノサイトの集団を定量化し、詳細な分子分析（単一細胞RNAシーケンシングと組織学）を行って、慢性白斑。 その後、研究者は、写真撮影と VASI スコアの定量化の両方によって、1 日、1 週間、1 か月、3 か月、および 6 か月の時点で、移植された領域の治療に対する反応を評価しました。 研究のこのアームは完了です。

研究の 3 番目のアームでは、研究者は低侵襲手順 (細胞解離を伴わない吸引ブリスター移植) を使用して、移植された皮膚とドナー皮膚をサンプリングします。この方法は、瘢痕を誘発することなく真皮から表皮を分離することができます。 太ももの上部の通常の色素沈着領域は、エピネフリンを含む 1% リドカインで麻酔されます。 吸引ブリスター技術である表皮採取システムを使用して、治験責任医師は白斑の影響を受けていない表皮の複数の小さな部分 (直径約 128 個の水泡 - 直径 1.8 mm) を、患者の大腿部の小さな正常領域 (5 cm2 ) から取り除きます。ドナー細胞と組織病理学的研究 (白斑領域から 2 つと正常なドナーの皮膚から 2 つ) の 4 つのサンプルを削除するための通常の陰圧器具を使用します。 次に、ドナー領域（太もも）の表皮を、患者が移植を希望する白斑の影響を受けた領域に移植します。 また、正常な皮膚とレシピエント部位からの4つの部分が組織病理学的評価のために送られます。

研究者はその後、1 日、1 週間、1 か月、3 か月、および 6 か月の移植領域での治療に対する反応を、両方の写真撮影によって評価し、色素沈着した表面積の変化を定量化し、VASI (Vitiligo Area Scoring Index) スコアを評価します。 . また、研究者は、組織病理学を通じて 2 つの白斑サンプルと 2 つの正常な皮膚サンプルを評価し、RNA シーケンス分析で特定された細胞の固有の集団がどこに局在しているかを評価します (アーム 2 から取得)。 研究者は、彼の移植手順が優れた再色素沈着をもたらし、ベースラインから 6 か月のフォローアップまでに表面積が平均 60% 減少する (SD=30%) という仮説を立てています。 サンプルサイズが 5 人の患者の場合、この研究では、有意水準 p=0.05 の両側対応のある t 検定に基づいて、この仮説を検定するために 90% の検出力が達成されます。 さらに、研究者は、手術用ブレード技術を使用して採取された 7 人の患者の結果 (手順は既に完了しており、フォローアップの結果は保留中) と、吸引水疱を使用して採取された 7 人の患者 (完了) および新たに提案された 7 人の患者の結果を比較します。実験グループ (現在までに 3 つ完了)。