백반증 치료에서 멜라닌 세포 각질세포 이식 절차의 효능 평가

연구의 첫 번째 부문에서 환자의 정상적으로 착색된 부위를 에피네프린이 포함된 1% 리도카인으로 마취했습니다. 연구자는 외과용 칼을 사용하여 환자의 허벅지에 있는 작은 영역(2cm2)에서 백반증의 영향을 받지 않은 표피의 작은 부분을 제거하여 기증자 세포를 얻었습니다. 외과용 칼로 수확한 표피를 Lactated Ringer's 용액으로 3회 세척한 다음 트립신을 사용하여 해리하여 세포를 단일 세포 현탁액으로 분리했습니다. 이식할 수혜 부위를 Erbium YAG(yttrium aluminum garnet) 레이저로 절제했습니다. 기증자 부위(허벅지)에서 분리된 단일 세포의 절반을 참가자가 이식에 관심이 있는 백반증이 있는 부위(5 cm2 면적)에 이식했습니다.

그런 다음 연구자는 1일, 1주, 1개월, 3개월, 6개월에 이식된 부위의 치료 반응을 사진과 VASI(Vitiligo Area Scoring Index) 점수를 정량화하여 평가했습니다.

VASI(Vitiligo Area Scoring Index)는 백반증 관련 비율이며 손 단위로 계산됩니다. 한 손 단위는 전체 신체 표면적의 약 1%에 해당합니다.

연구의 두 번째 부문에서 연구자는 최소 침습 절차(흡입 물집 이식)를 사용하여 이식된 피부와 기증자 피부를 샘플링했습니다. 이 방법은 흉터를 유발하지 않고 진피에서 표피를 분리할 수 있습니다. 상부 허벅지의 정상적으로 착색된 부위를 에피네프린이 함유된 1% 리도카인으로 마취했습니다. 흡인 물집 기술을 사용하여 연구자는 기증자 세포를 얻기 위해 환자의 허벅지에 있는 작은 영역(4 cm2 또는 0.6 인치 cm2)에서 백반증의 영향을 받지 않은 표피의 작은 부분을 제거했습니다. 채취한 표피를 Lactated Ringer's solution으로 3회 세척한 후 트립신을 사용하여 분리하여 세포를 단일 세포 현탁액으로 분리했습니다. 이식할 수혜 부위는 흡입 블리스터 장치를 사용하여 표피를 수확하는 데 사용되었습니다. 기증자 부위(허벅지)에서 분리된 단일 세포의 절반을 환자가 이식에 관심이 있는 백반증의 영향을 받는 부위(5 cm2 면적 또는 0.7 인치2)에 이식했습니다. 수혜 부위의 흡입 수포 피부를 동시에 단일 세포 현탁액으로 분리했습니다. 세포의 나머지 부분(공여체 및 수혜자 부위 모두에서 유래)은 멜라닌 세포 및 각질 세포의 집단을 정량화하기 위해 흐름 분류를 수행하고, 세포의 분자 특징을 특성화하기 위해 상세한 분자 분석(단일 세포 RNA 시퀀싱 및 조직학)을 수행했습니다. 만성 백반증. 그런 다음 연구자는 사진 촬영과 VASI 점수 정량화를 통해 1일, 1주, 1개월, 3개월, 6개월에 이식된 부위의 치료에 대한 반응을 평가했습니다. 이 연구 부문이 완료되었습니다.

연구의 세 번째 부문에서 조사자는 이식된 피부와 기증자 피부를 샘플링하기 위해 최소 침습 절차(세포 해리 없이 흡입 물집 이식)를 사용합니다. 이 방법은 흉터를 유발하지 않고 진피에서 표피를 분리할 수 있습니다. 허벅지 위쪽의 정상적으로 착색된 부위는 에피네프린이 함유된 1% 리도카인으로 마취됩니다. 흡인 물집 기술인 표피 수확 시스템을 사용하여 조사자는 백반증의 영향을 받지 않은 표피의 여러 작은 부분(약 128개 물집-직경 1.8mm)을 환자 허벅지의 작은 정상 영역(5cm2)에서 제거하여 조직병리학적 연구를 위해 4개의 샘플(백반 영역에서 2개, 정상 기증자 피부에서 2개)을 제거하기 위해 기증자 세포 및 일반 음압 기기를 사용합니다. 기증자 부위(허벅지)의 표피는 환자가 이식에 관심이 있는 백반증의 영향을 받는 부위에 이식됩니다. 또한 정상 피부와 수혜 부위의 4개 부분을 조직병리학적 평가를 위해 보냅니다.

그런 다음 연구자는 1일, 1주, 1개월, 3개월 및 6개월에 이식된 부위의 치료에 대한 반응을 사진 촬영, 탈색 표면의 변화를 정량화 및 VASI(Vitiligo Area Scoring Index) 점수로 평가합니다. . 또한 조사관은 조직병리학을 통해 2개의 백반증 샘플과 2개의 정상 피부 샘플을 평가하여 RNA 시퀀싱 분석에서 식별된 고유한 세포 집단이 어디에 국한되어 있는지 평가합니다(2군에서 획득). 연구자는 그의 이식 절차가 우수하거나 양호한 재색소화를 생성하여 기준선에서 6개월 후속 조치까지 평균 60% 표면적 감소(SD=30%)를 가져올 것이라고 가정합니다. 5명의 환자 샘플 크기로 이 연구는 p=0.05 유의 수준에서 양측 대응 t-검정을 기반으로 이 가설을 검정하는 90% 검정력을 달성할 것입니다. 또한, 연구자는 수술 블레이드 기법을 사용하여 채취한 7명의 환자(시술이 이미 완료되었고 후속 결과가 보류 중임)의 결과를 흡입 물집이 있는(완료) 채취된 7명의 환자 및 새로 제안된 7명의 환자의 결과와 비교할 것입니다. 실험군(현재까지 3개 완료).