A melanocita keratinocita transzplantációs eljárás hatékonyságának értékelése a vitiligo kezelésében

A vizsgálat első ágában a páciens egy normálisan pigmentált területét 1%-os lidokainnal és epinefrinnel érzéstelenítettük. A vizsgáló egy sebészeti kés segítségével a páciens combján lévő kis területről (2 cm2) eltávolította az epidermisz egy kis részét, amelyet nem érintett a vitiligo, hogy donorsejteket nyerjen. A sebészeti késsel betakarított epidermiszt háromszor mostuk Lactated Ringer-oldattal, majd tripszinnel disszociáltuk, hogy a sejteket egyetlen sejtszuszpenzióvá különítsük el. Az átültetendő recipiens területet Erbium YAG (ittrium alumínium gránát) lézerrel távolítottuk el. A donor területről (comb) a disszociált egysejtek felét ezután átültettük arra a vitiligo által érintett területre, amelyre a résztvevő átültetésre vágyik (5 cm2 terület).

A vizsgáló ezután értékelte a kezelésre adott választ az átültetett területeken 1 nap, 1 hét, 1 hónap és 3 hónap, valamint 6 hónap elteltével mind a fényképezés, mind a VASI (Vitiligo Area Scoring Index) pontszám meghatározásával.

A VASI (Vitiligo Area Scoring Index) a vitiligo érintettségének százalékos aránya, amelyet kézi egységekben számítanak ki. Egy kézi egység körülbelül a teljes testfelület 1%-ának felel meg.

A vizsgálat második ágában a vizsgáló minimálisan invazív eljárást (felszívásos buborékoltást) alkalmazott az átültetett bőrből és a donor bőrből való mintavételhez – ezzel a módszerrel elválaszthatja az epidermiszt a dermistől hegképződés nélkül. Egy normálisan pigmentált területet a comb felső részén érzéstelenítettünk 1%-os lidokainnal epinefrinnel. Szívós buborékos technikával a vizsgáló a páciens combján lévő kis területről (4 cm2 vagy 0,6 hüvelyk cm2) eltávolította az epidermisz egy kis részét, amelyet nem érintett a vitiligo, hogy donorsejteket nyerjen. Az összegyűjtött epidermiszt háromszor mostuk Ringer-laktált oldattal, majd tripszin alkalmazásával disszociáltuk, hogy a sejteket egyetlen sejtszuszpenzióvá különítsük el. Az átültetésre kerülő recipiens területeket az epidermisz betakarítására használták szívó buborékfólia eszközzel. A donor területről (comb) a disszociált egysejtek felét ezután átültettük arra a vitiligo által érintett területre, amelyre a páciens átültetésre vágyott (5 cm2 terület vagy 0,7 hüvelyk). A befogadó helyekről felszívódó hólyagbőrt egyidejűleg egyetlen sejtszuszpenzióvá disszociáltuk. A sejtek fennmaradó részének egy részét (mind a donor, mind a recipiens helyről) áramlási válogatásnak vetettük alá a melanociták és keratinociták populációinak számszerűsítésére, valamint részletes molekuláris elemzésnek (egysejtes RNS szekvenálás és szövettan), hogy jellemezzük a sejtek molekuláris jellemzőit. krónikus vitiligo. A vizsgáló ezután értékelte a kezelésre adott választ az átültetett területeken 1 nap, 1 hét, 1 hónap és 3 hónap, valamint 6 hónap elteltével mind a fényképezés, mind a VASI-pontszám számszerűsítése révén. A tanulmány ezen része befejeződött.

A vizsgálat harmadik ágában a vizsgáló egy minimálisan invazív eljárást (leszívásos hólyagos beültetést, sejtdisszociáció nélkül) alkalmaz az átültetett bőr és a donor bőr mintájának vételére – ezzel a módszerrel hegképződés nélkül elválaszthatja az epidermiszt a dermistől. Egy normálisan pigmentált területet a comb felső részén 1%-os lidokainnal és epinefrinnel érzéstelenítenek. Az epidermális begyűjtő rendszer segítségével, amely szívóhólyag-technika, a vizsgáló több kis részét (körülbelül 128 hólyag – 1,8 mm átmérőjű) eltávolítja a vitiligo által nem érintett felhámból egy kis normál területről (5 cm2) a páciens combján. donorsejteket, és hagyományos negatív nyomású műszert használva négy minta eltávolítására kórszövettani vizsgálat céljából (kettőt a vitiligo területről és kettőt a normál donor bőréről). A donor területről (comb) származó epidermiszt ezután átültetik arra a vitiligo által érintett területre, amelyre a páciens átültetésre vágyik. Ezenkívül a normál bőrből és a recipiens helyről származó négy részt elküldjük kórszövettani értékelésre.

A vizsgáló ezután értékeli a kezelésre adott választ az átültetett területeken 1 nap, 1 hét, 1 hónap és 3 hónap, valamint 6 hónap elteltével, mind fényképezéssel, mind a depigmentált felület változásának számszerűsítésével, mind a VASI (Vitiligo Area Scoring Index) pontszámmal. . Ezenkívül a vizsgáló a két vitiligo-mintát és a két normál bőrmintát kórszövettani vizsgálattal értékeli, hogy felmérje, hol lokalizálódnak az RNS-szekvenálási analízisben azonosított egyedi sejtpopulációk (a 2. karból szerezték be). A vizsgáló azt feltételezi, hogy a transzplantációs eljárása kiváló vagy jó repigmentációt eredményez, ami átlagosan 60%-os felületcsökkenést (SD=30%) eredményez a kiindulási értékhez képest a 6 hónapos követésig. Az 5 betegből álló mintaszámmal ez a vizsgálat 90%-os teljesítményt fog elérni ennek a hipotézisnek a tesztelésére, egy kétoldali páros t-próba alapján p=0,05 szignifikancia szinten. Ezenkívül a vizsgáló összehasonlítja a sebészeti penge technikával begyűjtött 7 beteg eredményeit (az eljárás már befejeződött, és a nyomon követési eredmények függőben vannak) 7, a szívóhólyaggal begyűjtött (befejezett) és az újonnan javasolt hét beteg eredményeivel. kísérleti csoport (máig három fejeződött be).