Utvärdering av effektiviteten av melanocytkeratinocyttransplantationsproceduren vid behandling av vitiligo

I den första armen av studien sövdes ett normalt pigmenterat område på patienten med 1 % lidokain med epinefrin. Med hjälp av en kirurgisk kniv tog utredaren bort en liten del av epidermis som är opåverkad av vitiligo från ett litet område (2 cm2) på patientens lår för att få donatorceller. Epidermis som skördades med den kirurgiska kniven tvättades med Ringers laktatlösning tre gånger och dissocierades sedan med användning av trypsin för att separera cellerna till en enda cellsuspension. Recipientområdet som skulle ympas ablerades med en Erbium YAG(yttrium aluminium granat)laser. Hälften av de dissocierade enstaka cellerna från donatorområdet (låret) transplanterades sedan till det område som drabbats av vitiligo som deltagaren är intresserad av att transplantera (5 cm2 area).

Utredaren utvärderade sedan svaret på behandlingen i de transplanterade områdena efter 1 dag, 1 vecka, 1 månad och 3 månader och 6 månader genom både fotografering och kvantifiering av VASI-poängen (Vitiligo Area Scoring Index).

VASI (Vitiligo Area Scoring Index) är andelen vitiligo-inblandning och beräknas i termer av handenheter. En handenhet motsvarar ungefär 1 % av den totala kroppsytan.

I den andra grenen av studien använde utredaren ett minimalt invasivt förfarande (sugblåstransplantation) för att prova den transplanterade huden och donatorhuden - denna metod kan separera epidermis från dermis utan att framkalla ett ärr. Ett normalt pigmenterat område på övre låret bedövades med 1 % lidokain med epinefrin. Med hjälp av en sugblisterteknik tog utredaren bort en liten del av epidermis som var opåverkad av vitiligo från ett litet område (4 cm2 eller 0,6 tum cm2) på patientens lår för att få donatorceller. Epidermis som skördades tvättades med Ringers laktatlösning tre gånger och dissocierades sedan med användning av trypsin för att separera cellerna till en enda cellsuspension. Recipientområdena som skulle transplanteras användes för att skörda epidermis med användning av en sugblisteranordning. Hälften av de dissocierade enstaka cellerna från donatorområdet (låret) transplanterades sedan till det område som drabbats av vitiligo som patienten var intresserad av att transplantera (5 cm2 area eller 0,7 tum2). Sugblisterhuden från mottagarställena dissocierades samtidigt till en enda cellsuspension. En del av återstoden av cellerna (från både givar- och mottagarstället) utsattes för flödessortering för att kvantifiera populationerna av melanocyter och keratinocyter och för detaljerad molekylär analys (encellig RNA-sekvensering och histologi) för att karakterisera de molekylära egenskaperna hos kronisk vitiligo. Utredaren utvärderade sedan svaret på behandlingen i de transplanterade områdena efter 1 dag, 1 vecka, 1 månad och 3 månader och 6 månader genom både fotografering och kvantifiering av VASI-poängen. Denna del av studien är klar.

I den tredje grenen av studien använder utredaren en minimalt invasiv procedur (sugblåstransplantation utan celldissociation) för att prova den transplanterade huden och donatorhuden - denna metod kan separera epidermis från dermis utan att framkalla ett ärr. Ett normalt pigmenterat område på låret kommer att bedövas med 1% lidokain med epinefrin. Med hjälp av ett epidermalt skördsystem som är en sugblåsteknik, kommer utredaren att ta bort flera små delar (cirka 128 blåsor - 1,8 mm i diameter) av epidermis opåverkad av vitiligo från ett litet normalt område (5 cm2) på patientens lår för att erhålla donatorceller och använda ett vanligt undertrycksinstrument för att ta bort fyra prover för histopatologisk studie (två från vitiligoområdet och två från den normala donatorhuden). Överhuden från donatorområdet (låret) kommer sedan att transplanteras till det område som drabbats av vitiligo som patienten är intresserad av att transplantera. Dessutom kommer de fyra delarna från den normala huden och mottagarstället att skickas för den histopatologiska utvärderingen.

Utredaren kommer sedan att utvärdera svaret på behandling i de transplanterade områdena efter 1 dag, 1 vecka, 1 månad och 3 månader och 6 månader genom både fotografering, kvantifiering av förändringen i depigmenterad yta och VASI (Vitiligo Area Scoring Index)-poängen . Utredaren kommer också att utvärdera de två vitiligoproverna och två normala hudprover genom histopatologi för att bedöma var de unika populationerna av celler som identifierats i deras RNA-sekvenseringsanalys är lokaliserade (erhållna från arm 2). Utredaren antar att hans transplantationsförfarande kommer att ge utmärkt till bra repigmentering, vilket resulterar i en genomsnittlig minskning av ytarean med 60 % (SD=30 %) från baslinjen till 6 månaders uppföljning. Med en provstorlek på 5 patienter kommer denna studie att uppnå 90 % kraft för att testa denna hypotes baserat på ett dubbelsidigt parat t-test på p=0,05 signifikansnivå. Dessutom kommer utredaren att jämföra resultaten från de 7 patienter som skördats med hjälp av den kirurgiska bladtekniken (proceduren är redan avslutad och uppföljningsresultat väntar) med resultaten från 7 patienter som skördats med sugblåsorna (slutförda) och sju patienter från de nyligen föreslagna experimentgrupp (tre slutförda hittills).