Evaluatie van de werkzaamheid van de melanocyt-keratinocyttransplantatieprocedure bij de behandeling van vitiligo

In de eerste arm van het onderzoek werd een normaal gepigmenteerd gebied van de patiënt verdoofd met 1% lidocaïne met epinefrine. Met behulp van een chirurgisch mes verwijderde de onderzoeker een klein deel van de epidermis dat niet is aangetast door vitiligo uit een klein gebied (2 cm2) op de dij van de patiënt om donorcellen te verkrijgen. Epidermis die werd geoogst met het chirurgische mes werd driemaal gewassen met Ringer-lactaatoplossing en vervolgens gedissocieerd met behulp van trypsine om de cellen te scheiden in een enkele celsuspensie. Het te transplanteren ontvangende gebied werd geablateerd met een Erbium YAG (yttrium aluminium granaat) laser. De helft van de gedissocieerde enkelvoudige cellen van het donorgebied (dij) werd vervolgens getransplanteerd naar het gebied met vitiligo dat de deelnemer zou willen transplanteren (gebied van 5 cm2).

De onderzoeker evalueerde vervolgens de respons op de behandeling in de getransplanteerde gebieden na 1 dag, 1 week, 1 maand en 3 maanden en 6 maanden door zowel fotografie als het kwantificeren van de VASI-score (Vitiligo Area Scoring Index).

VASI (Vitiligo Area Scoring Index) is het percentage vitiligo-betrokkenheid en wordt berekend in termen van handeenheden. Een handeenheid is ongeveer gelijk aan 1% van het totale lichaamsoppervlak.

In de tweede tak van het onderzoek gebruikte de onderzoeker een minimaal invasieve procedure (zuigblaartransplantatie) om monsters te nemen van de getransplanteerde huid en de donorhuid. Deze methode kan de epidermis van de dermis scheiden zonder een litteken te veroorzaken. Een normaal gepigmenteerd gebied op het bovenbeen werd verdoofd met 1% lidocaïne met epinefrine. Met behulp van een zuigblaastechniek verwijderde de onderzoeker een klein deel van de epidermis dat niet was aangetast door vitiligo uit een klein gebied (4 cm2 of 0,6 inch cm2) op de dij van de patiënt om donorcellen te verkrijgen. Epidermis die werd geoogst, werd driemaal gewassen met Ringer-lactaatoplossing en vervolgens gedissocieerd met behulp van trypsine om de cellen te scheiden in een enkele celsuspensie. De te transplanteren ontvangende gebieden werden gebruikt om de epidermis te oogsten met behulp van een zuigblisterapparaat. De helft van de gedissocieerde enkelvoudige cellen van het donorgebied (dijbeen) werd vervolgens getransplanteerd naar het gebied met vitiligo dat de patiënt wilde transplanteren (gebied van 5 cm2 of 0,7 inch2). De huid van de zuigblister van de ontvangende plaatsen werd tegelijkertijd gedissocieerd tot een enkele celsuspensie. Een deel van de rest van de cellen (van zowel de donor- als de ontvangerlocatie) werd onderworpen aan stroomsortering om de populaties van melanocyten en keratinocyten te kwantificeren en aan gedetailleerde moleculaire analyse (eencellige RNA-sequencing en histologie) om de moleculaire kenmerken van chronische vitiligo. De onderzoeker evalueerde vervolgens de respons op de behandeling in de getransplanteerde gebieden na 1 dag, 1 week, 1 maand en 3 maanden en 6 maanden door zowel fotografie als het kwantificeren van de VASI-score. Deze tak van de studie is voltooid.

In de derde tak van het onderzoek gebruikt de onderzoeker een minimaal invasieve procedure (zuigblaastransplantatie zonder celdissociatie) om monsters van de getransplanteerde huid en de donorhuid te nemen. Deze methode kan de epidermis van de dermis scheiden zonder een litteken te veroorzaken. Een normaal gepigmenteerd gebied op het bovenbeen wordt verdoofd met 1% lidocaïne met epinefrine. Met behulp van een epidermaal oogstsysteem, een zuigblistertechniek, verwijdert de onderzoeker meerdere kleine delen (ongeveer 128 blaren - 1,8 mm in diameter) van de epidermis die niet is aangetast door vitiligo uit een klein normaal gebied (5 cm2) op de dij van de patiënt om donorcellen en het gebruik van een regulier onderdrukinstrument voor het verwijderen van vier monsters voor histopathologisch onderzoek (twee uit het vitiligogebied en twee uit de normale donorhuid). De epidermis van het donorgebied (dij) wordt vervolgens getransplanteerd naar het gebied dat is aangetast door vitiligo en dat de patiënt wil transplanteren. Ook worden de vier delen van de normale huid en de plaats van ontvangst verzonden voor de histopathologische evaluatie.

De onderzoeker zal vervolgens de respons op de behandeling in de getransplanteerde gebieden na 1 dag, 1 week, 1 maand en 3 maanden en 6 maanden evalueren door middel van beide fotografie, waarbij de verandering in het gedepigmenteerde oppervlak en de VASI-score (Vitiligo Area Scoring Index) worden gekwantificeerd. . Ook zal de onderzoeker de twee vitiligomonsters en twee normale huidmonsters evalueren via histopathologie om te beoordelen waar de unieke celpopulaties geïdentificeerd in hun RNA-sequencing-analyse gelokaliseerd zijn (verkregen uit arm 2). De onderzoeker veronderstelt dat zijn transplantatieprocedure uitstekende tot goede herpigmentatie zal opleveren, resulterend in een gemiddelde vermindering van 60% van het oppervlak (SD=30%) vanaf de basislijn tot de follow-up na 6 maanden. Met een steekproef van 5 patiënten zal dit onderzoek een vermogen van 90% bereiken om deze hypothese te testen op basis van een tweezijdige gepaarde t-test op significantieniveau p=0,05. Daarnaast zal de onderzoeker de resultaten vergelijken van de 7 patiënten die zijn geoogst met behulp van de chirurgische mestechniek (procedure al voltooid en follow-upresultaten in behandeling) met de resultaten van 7 patiënten die zijn geoogst met de zuigblisters (voltooid) en zeven patiënten van de nieuw voorgestelde experimentele groep (drie afgerond tot op heden).