Melanosyyttikeratinosyyttisiirtomenetelmän tehokkuuden arviointi vitiligon hoidossa

Tutkimuksen ensimmäisessä osassa potilaan normaalisti pigmentoitunut alue nukutettiin 1-prosenttisella lidokaiinilla ja epinefriinillä. Tutkija poisti kirurgisella veitsellä pienen osan orvaskettä, johon vitiligo ei vaikuttanut, pieneltä alueelta (2 cm2) potilaan reidessä luovuttajasolujen saamiseksi. Epidermis, joka kerättiin kirurgisella veitsellä, pestiin Lactated Ringerin liuoksella kolme kertaa ja dissosioitiin sitten käyttämällä trypsiiniä solujen erottamiseksi yksisolususpensioksi. Siirrettävä vastaanottajaalue poistettiin Erbium YAG (yttrium-alumiinigranaatti)laserilla. Puolet luovuttajaalueen (reiden) dissosioituneista yksittäisistä soluista siirrettiin sitten vitiligon vaivaamalle alueelle, jonka siirtämisestä osallistuja on kiinnostunut (5 cm2 pinta-ala).

Tämän jälkeen tutkija arvioi hoitovasteen siirretyillä alueilla 1 päivän, 1 viikon, 1 kuukauden ja 3 kuukauden ja 6 kuukauden kohdalla sekä valokuvaamalla että kvantifioimalla VASI-pistemäärän (Vitiligo Area Scoring Index).

VASI (Vitiligo Area Scoring Index) on vitiligon esiintymisen prosenttiosuus ja se lasketaan käsiyksikköinä. Yksi käsiyksikkö vastaa noin 1 % kehon kokonaispinta-alasta.

Tutkimuksen toisessa osassa tutkija käytti minimaalisesti invasiivista toimenpidettä (imurakkulasiirto) ottaakseen näytteen siirretystä ihosta ja luovuttajaihosta – tällä menetelmällä voidaan erottaa orvaskesi verinahasta aiheuttamatta arpia. Normaalisti pigmentoitunut alue reiden yläosassa nukutettiin 1-prosenttisella lidokaiinilla ja epinefriinillä. Käyttäen imurakkulatekniikkaa tutkija poisti pienen osan orvaskettä, johon vitiligo ei vaikuttanut, pieneltä alueelta (4 cm2 tai 0,6 tuuman cm2) potilaan reidessä luovuttajasolujen saamiseksi. Kerätty epidermis pestiin Ringerin laktaattiliuoksella kolme kertaa ja dissosioitiin sitten käyttämällä trypsiiniä solujen erottamiseksi yksittäiseksi solususpensioksi. Siirrettäviä vastaanottajaalueita käytettiin orvaskeden keräämiseen käyttämällä imukuviolaitetta. Puolet luovuttajaalueen (reiden) irrotetuista yksittäisistä soluista siirrettiin sitten vitiligo-alueelle, jota potilas oli kiinnostunut siirtämään (5 cm2 pinta-ala tai 0,7 tuumaa2). Imurakkula-iho vastaanottajakohdista dissosioitui samanaikaisesti yhdeksi solususpensioksi. Osa jäljellä olevista soluista (sekä luovuttaja- että vastaanottajapaikasta) altistettiin virtauslajittelulle melanosyytti- ja keratinosyyttipopulaatioiden kvantifioimiseksi ja yksityiskohtaiselle molekyylianalyysille (yksisoluisen RNA:n sekvensointi ja histologia) solujen molekyyliominaisuuksien karakterisoimiseksi. krooninen vitiligo. Tämän jälkeen tutkija arvioi hoitovasteen siirretyillä alueilla 1 päivän, 1 viikon, 1 kuukauden ja 3 kuukauden ja 6 kuukauden kohdalla sekä valokuvaamalla että kvantifioimalla VASI-pisteet. Tämä tutkimuksen osa on valmis.

Tutkimuksen kolmannessa osassa tutkija käyttää minimaalisesti invasiivista toimenpidettä (imurakkulasiirto ilman solujen dissosiaatiota) ottaakseen näytteen siirretystä ihosta ja luovuttajaihosta – tällä menetelmällä voidaan erottaa orvaskesi verinahasta aiheuttamatta arpia. Normaalisti pigmentoitunut alue reiden yläosassa nukutetaan 1-prosenttisella lidokaiinilla ja epinefriinillä. Käyttämällä orvaskedenpoistojärjestelmää, joka on imurakkulatekniikka, tutkija poistaa useita pieniä osia (noin 128 rakkulaa - halkaisijaltaan 1,8 mm) orvaskettä, johon vitiligo ei vaikuta, pieneltä normaalilta alueelta (5 cm2) potilaan reidessä. luovuttajasolut ja käyttämällä säännöllistä alipaineinstrumenttia neljän näytteen poistamiseksi histopatologista tutkimusta varten (kaksi vitiligo-alueelta ja kaksi normaalista luovuttajan ihosta). Luovuttajaalueen (reiden) orvaskesi siirretään sitten vitiligo-alueelle, jota potilas on kiinnostunut siirtämään. Myös neljä osaa normaalista ihosta ja vastaanottajapaikasta lähetetään histopatologiseen arviointiin.

Tämän jälkeen tutkija arvioi hoitovasteen siirretyillä alueilla 1 päivän, 1 viikon, 1 kuukauden ja 3 kuukauden ja 6 kuukauden kohdalla sekä valokuvaamalla, kvantifioimalla depigmentoituneen pinta-alan muutoksen ja VASI-pistemäärän (Vitiligo Area Scoring Index). . Lisäksi tutkija arvioi kaksi vitiligo-näytettä ja kaksi normaalia ihonäytettä histopatologian avulla arvioidakseen, missä niiden RNA-sekvensointianalyysissä tunnistetut ainutlaatuiset solupopulaatiot sijaitsevat (saatu haarasta 2). Tutkija olettaa, että hänen siirtotoimenpiteensä tuottaa erinomaisen hyvään repigmentaatioon, mikä johtaa keskimäärin 60 %:n pienenemiseen pinta-alassa (SD = 30 %) lähtötasosta 6 kuukauden seurantaan. Kun otoskoko on 5 potilasta, tämä tutkimus saavuttaa 90 %:n tehon tämän hypoteesin testaamiseen perustuen kaksipuoliseen parilliseen t-testiin p = 0,05 merkitsevyystasolla. Lisäksi tutkija vertaa tuloksia seitsemältä kirurgisella terätekniikalla kerätyltä potilaalta (toimenpiteet on jo suoritettu ja seurantatuloksia odotettavissa) tuloksiin 7 potilaasta, jotka kerättiin imurakkuloilla (valmis) ja seitsemältä äskettäin ehdotetusta potilaasta. koeryhmä (kolme tähän mennessä).