Valutazione dell'efficacia della procedura di trapianto di cheratinociti di melanociti nel trattamento della vitiligine

Nel primo braccio dello studio, un'area normalmente pigmentata del paziente è stata anestetizzata con lidocaina all'1% con epinefrina. Utilizzando un coltello chirurgico, l'investigatore ha rimosso una piccola porzione dell'epidermide che non è interessata dalla vitiligine da una piccola area (2 cm2) sulla coscia del paziente per ottenere cellule donatrici. L'epidermide prelevata con il bisturi chirurgico è stata lavata tre volte con la soluzione di Ringer lattato e poi dissociata usando tripsina per separare le cellule in una singola sospensione cellulare. L'area ricevente da innestare è stata ablata con un laser Erbium YAG (yttrium aluminium garnet). La metà delle singole cellule dissociate dall'area donatrice (coscia) è stata quindi trapiantata nell'area interessata dalla vitiligine che il partecipante è interessato ad innestare (area di 5 cm2).

Lo sperimentatore ha quindi valutato la risposta al trattamento nelle aree trapiantate a 1 giorno, 1 settimana, 1 mese e 3 mesi e 6 mesi sia mediante fotografia che quantificando il punteggio VASI (Vitiligo Area Scoring Index).

VASI (Vitiligo Area Scoring Index) è la percentuale di coinvolgimento della vitiligine ed è calcolata in termini di unità di mano. Un'unità della mano è approssimativamente equivalente all'1% della superficie totale del corpo.

Nel secondo braccio dello studio, il ricercatore ha utilizzato una procedura minimamente invasiva (innesto di blister di aspirazione) per campionare la pelle innestata e la pelle del donatore: questo metodo può separare l'epidermide dal derma senza indurre una cicatrice. Un'area normalmente pigmentata sulla parte superiore della coscia è stata anestetizzata con lidocaina all'1% con epinefrina. Usando una tecnica di aspirazione del blister, l'investigatore ha rimosso una piccola porzione dell'epidermide che non era interessata dalla vitiligine da una piccola area (4 cm2 o 0,6 pollici cm2) sulla coscia del paziente per ottenere cellule donatrici. L'epidermide che è stata raccolta è stata lavata tre volte con la soluzione di Ringer lattato e quindi dissociata usando tripsina per separare le cellule in una sospensione a singola cellula. Le aree riceventi da innestare sono state utilizzate per raccogliere l'epidermide utilizzando un dispositivo di aspirazione blister. La metà delle singole cellule dissociate dall'area donatrice (coscia) è stata quindi trapiantata nell'area affetta da vitiligine che il paziente era interessato ad innestare (area di 5 cm2 o 0,7 pollici2). La pelle del blister di aspirazione dai siti riceventi è stata simultaneamente dissociata in una singola sospensione cellulare. Una porzione del resto delle cellule (sia dal donatore che dal sito ricevente) è stata sottoposta a flow sorting per quantificare le popolazioni di melanociti e cheratinociti e ad analisi molecolare dettagliata (sequenziamento e istologia dell'RNA unicellulare) per caratterizzare le caratteristiche molecolari di vitiligine cronica. Lo sperimentatore ha quindi valutato la risposta al trattamento nelle aree trapiantate a 1 giorno, 1 settimana, 1 mese e 3 mesi e 6 mesi sia mediante fotografie che quantificando il punteggio VASI. Questo braccio dello studio è completo.

Nel terzo braccio dello studio, il ricercatore utilizza una procedura minimamente invasiva (innesto di blister di aspirazione senza dissociazione cellulare) per campionare la pelle innestata e la pelle del donatore: questo metodo può separare l'epidermide dal derma senza indurre una cicatrice. Un'area normalmente pigmentata sulla parte superiore della coscia verrà anestetizzata con lidocaina all'1% con epinefrina. Utilizzando un sistema di raccolta epidermica che è una tecnica di blister di aspirazione, l'investigatore rimuoverà più piccole porzioni (circa 128 vescicole-1,8 mm di diametro) dell'epidermide non interessata dalla vitiligine da una piccola area normale (5 cm2) sulla coscia del paziente per ottenere cellule del donatore e utilizzando un normale strumento a pressione negativa per prelevare quattro campioni per lo studio istopatologico (due dall'area della vitiligine e due dalla normale pelle del donatore). L'epidermide della zona donatrice (coscia) verrà poi trapiantata sulla zona interessata dalla vitiligine che il paziente desidera innestare. Inoltre, le quattro porzioni dalla pelle normale e il sito ricevente verranno inviate per la valutazione istopatologica.

Lo sperimentatore valuterà quindi la risposta al trattamento nelle aree trapiantate a 1 giorno, 1 settimana, 1 mese e 3 mesi e 6 mesi sia mediante fotografia, quantificando la variazione della superficie depigmentata e il punteggio VASI (Vitiligo Area Scoring Index) . Inoltre, lo sperimentatore valuterà i due campioni di vitiligine e due campioni di pelle normale attraverso l'istopatologia per valutare dove sono localizzate le popolazioni uniche di cellule identificate nella loro analisi di sequenziamento dell'RNA (ottenuta dal braccio 2). Il ricercatore ipotizza che la sua procedura di trapianto produrrà una ripigmentazione da eccellente a buona, con una riduzione media del 60% dell'area superficiale (SD=30%) dal basale al follow-up a 6 mesi. Con una dimensione del campione di 5 pazienti, questo studio raggiungerà il 90% di potenza per testare questa ipotesi sulla base di un t-test accoppiato a due code con livello di significatività p=0,05. Inoltre, lo sperimentatore confronterà i risultati dei 7 pazienti raccolti utilizzando la tecnica della lama chirurgica (procedura già completata e risultati di follow-up in attesa) con i risultati di 7 pazienti raccolti con i blister di aspirazione (completati) e sette pazienti della nuova proposta gruppo sperimentale (tre completati fino ad oggi).