Evaluering av effektiviteten av melanocytt-keratinocytttransplantasjonsprosedyren ved behandling av vitiligo

I den første armen av studien ble et normalt pigmentert område på pasienten bedøvet med 1 % lidokain med epinefrin. Ved hjelp av en kirurgisk kniv fjernet etterforskeren en liten del av epidermis som er upåvirket av vitiligo fra et lite område (2 cm2) på pasientens lår for å få donorceller. Epidermis som ble høstet med den kirurgiske kniven ble vasket med Lactated Ringers løsning tre ganger og deretter dissosiert ved bruk av trypsin for å separere cellene i en enkelt cellesuspensjon. Mottakerområdet som skulle podes ble fjernet med en Erbium YAG(yttrium aluminium granat)laser. Halvparten av de dissosierte enkeltcellene fra donorområdet (låret) ble deretter transplantert til området rammet av vitiligo som deltakeren er interessert i å transplantere (5 cm2 område).

Etterforskeren evaluerte deretter respons på behandling i de transplanterte områdene etter 1 dag, 1 uke, 1 måned og 3 måneder og 6 måneder ved både fotografering og kvantifisering av VASI (Vitiligo Area Scoring Index)-score.

VASI (Vitiligo Area Scoring Index) er prosentandelen av vitiligo-involvering og beregnes i form av håndenheter. En håndenhet tilsvarer omtrent 1 % av den totale kroppsoverflaten.

I den andre delen av studien brukte etterforskeren en minimalt invasiv prosedyre (sugblistertransplantasjon) for å prøve den podede huden og donorhuden - denne metoden kan skille epidermis fra dermis uten å indusere et arr. Et normalt pigmentert område på overlåret ble bedøvet med 1 % lidokain med epinefrin. Ved å bruke en sugeblemmeteknikk fjernet etterforskeren en liten del av epidermis som var upåvirket av vitiligo fra et lite område (4 cm2 eller 0,6 tommer cm2) på pasientens lår for å få donorceller. Epidermis som ble høstet ble vasket med Lactated Ringers løsning tre ganger og deretter dissosiert ved bruk av trypsin for å separere cellene i en enkelt cellesuspensjon. Resipientområdene som skulle transplanteres ble brukt til å høste epidermis ved bruk av en sugeblisteranordning. Halvparten av de dissosierte enkeltcellene fra donorområdet (låret) ble deretter transplantert til området rammet av vitiligo som pasienten var interessert i å transplantere (5 cm2 område eller 0,7 tommer2). Sugeblemmehuden fra mottakerstedene ble samtidig dissosiert til en enkeltcellesuspensjon. En del av resten av cellene (fra både giver- og mottakerstedet) ble utsatt for strømningssortering for å kvantifisere populasjonene av melanocytter og keratinocytter og for detaljert molekylær analyse (enkeltcellet RNA-sekvensering og histologi) for å karakterisere de molekylære egenskapene til kronisk vitiligo. Etterforskeren evaluerte deretter respons på behandling i de transplanterte områdene etter 1 dag, 1 uke, 1 måned og 3 måneder og 6 måneder ved både fotografering og kvantifisering av VASI-skåren. Denne delen av studien er fullført.

I den tredje delen av studien bruker etterforskeren en minimalt invasiv prosedyre (sugeblemmetransplantasjon uten celledissosiasjon) for å prøve den podede huden og donorhuden - denne metoden kan skille epidermis fra dermis uten å indusere et arr. Et normalt pigmentert område på overlåret vil bli bedøvet med 1 % lidokain med epinefrin. Ved å bruke et epidermalt høstingssystem som er en sugeblemmeteknikk, vil etterforskeren fjerne flere små porsjoner (ca. 128 blemmer - 1,8 mm i diameter) av epidermis upåvirket av vitiligo fra et lite normalt område (5 cm2) på pasientens lår for å få tak i det. donorceller og bruk av et vanlig undertrykksinstrument for å fjerne fire prøver for histopatologisk undersøkelse (to fra vitiligoområdet og to fra normal donorhud). Epidermis fra donorområdet (låret) vil deretter bli transplantert til det området som er rammet av vitiligo som pasienten er interessert i å transplantere. Dessuten vil de fire porsjonene fra den normale huden og mottakerstedet bli sendt til histopatologisk evaluering.

Etterforskeren vil deretter evaluere respons på behandling i de transplanterte områdene etter 1 dag, 1 uke, 1 måned og 3 måneder og 6 måneder ved både fotografering, kvantifisere endringen i depigmentert overflate og VASI (Vitiligo Area Scoring Index)-score . Etterforskeren vil også evaluere de to vitiligoprøvene og to normale hudprøver gjennom histopatologi for å vurdere hvor de unike cellepopulasjonene identifisert i deres RNA-sekvenseringsanalyse er lokalisert (innhentet fra arm 2). Etterforskeren antar at transplantasjonsprosedyren hans vil gi utmerket til god repigmentering, noe som resulterer i gjennomsnittlig 60 % reduksjon i overflateareal (SD=30 %) fra baseline til 6-måneders oppfølging. Med en prøvestørrelse på 5 pasienter vil denne studien oppnå 90 % kraft til å teste denne hypotesen basert på en tosidig paret t-test på p=0,05 signifikansnivå. I tillegg vil etterforskeren sammenligne resultatene fra de 7 pasientene høstet ved bruk av kirurgisk bladteknikk (prosedyren er allerede fullført og oppfølgingsresultatene venter) med resultatene fra 7 pasienter høstet med sugeblærene (fullførte) og syv pasienter fra de nylig foreslåtte eksperimentell gruppe (tre fullførte til dags dato).