Оценка эффективности процедуры трансплантации меланоцитов-кератиноцитов при лечении витилиго

В первой группе исследования нормальную пигментированную область пациента анестезировали 1% раствором лидокаина с адреналином. С помощью хирургического ножа исследователь удалил небольшой участок эпидермиса, не пораженный витилиго, с небольшого участка (2 см2) на бедре пациента для получения донорских клеток. Эпидермис, собранный хирургическим ножом, трижды промывали раствором лактата Рингера, а затем диссоциировали с использованием трипсина для разделения клеток на суспензию отдельных клеток. Реципиентная область, подлежащая пересадке, была удалена лазером Erbium YAG (иттрий-алюминиевый гранат). Половину диссоциированных одиночных клеток из донорской области (бедро) затем трансплантировали в область, пораженную витилиго, которую участник заинтересован в пересадке (площадь 5 см2).

Затем исследователь оценивал реакцию на лечение в пересаженных областях через 1 день, 1 неделю, 1 месяц, 3 месяца и 6 месяцев как с помощью фотографии, так и количественной оценки по шкале VASI (индекс оценки области витилиго).

VASI (индекс оценки площади витилиго) представляет собой процент вовлечения витилиго и рассчитывается в единицах руки. Одна ручная единица примерно эквивалентна 1% от общей площади поверхности тела.

Во второй группе исследования исследователь использовал минимально инвазивную процедуру (аспирация волдырей) для взятия образцов пересаженной кожи и донорской кожи — этот метод позволяет отделить эпидермис от дермы, не вызывая образования рубца. Нормально пигментированный участок верхней части бедра обезболивали 1% лидокаином с адреналином. Используя метод аспирационных пузырей, исследователь удалил небольшую часть эпидермиса, которая не была поражена витилиго, с небольшого участка (4 см2 или 0,6 дюйма см2) на бедре пациента, чтобы получить донорские клетки. Собранный эпидермис трижды промывали раствором лактата Рингера и затем диссоциировали с использованием трипсина для разделения клеток на суспензию отдельных клеток. Области-реципиенты, подлежащие трансплантации, использовались для сбора эпидермиса с помощью устройства для отсасывания волдырей. Половину диссоциированных одиночных клеток из донорской области (бедро) затем трансплантировали в область, пораженную витилиго, которую пациент хотел пересадить (площадь 5 см2 или 0,7 дюйма2). Всасывающие волдыри кожи реципиентных участков одновременно диссоциировали в суспензию одиночных клеток. Часть оставшихся клеток (как из донорского, так и из реципиентного участка) подвергали потоковой сортировке для количественного определения популяций меланоцитов и кератиноцитов, а также для детального молекулярного анализа (секвенирование одноклеточной РНК и гистология) для характеристики молекулярных особенностей клеток. хроническое витилиго. Затем исследователь оценивал реакцию на лечение в пересаженных областях через 1 день, 1 неделю, 1 месяц, 3 месяца и 6 месяцев как с помощью фотографии, так и количественной оценки по шкале VASI. Эта часть исследования завершена.

В третьей группе исследования исследователь использует минимально инвазивную процедуру (аспирация волдырей без диссоциации клеток) для взятия образцов пересаженной кожи и донорской кожи — этот метод может отделить эпидермис от дермы, не вызывая образования рубца. Нормально пигментированную область на верхней части бедра анестезируют 1% лидокаином с адреналином. Используя систему забора эпидермиса, которая представляет собой метод аспирации волдырей, исследователь удалит несколько небольших участков (около 128 пузырей диаметром 1,8 мм) эпидермиса, не пораженного витилиго, с небольшого нормального участка (5 см2) на бедре пациента, чтобы получить донорских клеток и с помощью обычного прибора с отрицательным давлением для взятия четырех образцов для гистопатологического исследования (два из области витилиго и два из нормальной донорской кожи). Затем эпидермис из донорской области (бедра) будет пересажен в область, пораженную витилиго, которую пациент заинтересован в пересадке. Кроме того, четыре участка нормальной кожи и участка реципиента будут отправлены на гистопатологическую оценку.

Затем исследователь оценит реакцию на лечение в пересаженных областях через 1 день, 1 неделю, 1 месяц, 3 месяца и 6 месяцев с помощью фотографии, количественно определяя изменение площади депигментированной поверхности и оценку VASI (индекс оценки области витилиго). . Кроме того, исследователь оценит два образца витилиго и два образца нормальной кожи с помощью гистопатологии, чтобы определить, где локализованы уникальные популяции клеток, идентифицированные в их анализе секвенирования РНК (полученные из группы 2). Исследователь предполагает, что его процедура трансплантации приведет к репигментации от отличной до хорошей, что приведет к уменьшению площади поверхности в среднем на 60% (SD = 30%) по сравнению с исходным уровнем до 6-месячного наблюдения. При размере выборки в 5 пациентов это исследование достигнет мощности 90% для проверки этой гипотезы на основе двустороннего парного t-критерия при уровне значимости p = 0,05. Кроме того, исследователь сравнит результаты 7 пациентов, собранных с использованием техники хирургического лезвия (процедура уже завершена, и ожидаются результаты последующего наблюдения), с результатами 7 пациентов, собранных с помощью аспирационных пузырей (завершенных), и семи пациентов с недавно предложенным методом. экспериментальная группа (три завершены на сегодняшний день).