Hodnocení účinnosti postupu transplantace keratinocytů melanocytů v léčbě vitiliga

V prvním rameni studie byla normálně pigmentovaná oblast na pacientovi anestetizována 1% lidokainem s adrenalinem. Pomocí chirurgického nože výzkumník odstranil malou část epidermis, která není ovlivněna vitiligem, z malé oblasti (2 cm2) na stehně pacienta, aby získal dárcovské buňky. Epidermis, která byla sklizena chirurgickým nožem, byla třikrát promyta laktátovým Ringerovým roztokem a poté disociována pomocí trypsinu k oddělení buněk do jediné buněčné suspenze. Oblast příjemce, která má být roubována, byla odstraněna laserem Erbium YAG (yttrium aluminium garnet). Polovina disociovaných jednotlivých buněk z dárcovské oblasti (stehna) byla poté transplantována do oblasti postižené vitiligem, o kterou má účastník zájem (oblast 5 cm2).

Výzkumník poté vyhodnotil odpověď na léčbu v transplantovaných oblastech 1 den, 1 týden, 1 měsíc a 3 měsíce a 6 měsíců pomocí fotografie a kvantifikace skóre VASI (Vitiligo Area Scoring Index).

VASI (Vitiligo Area Scoring Index) je procento postižení vitiliga a vypočítává se v jednotkách ruky. Jedna jednotka ruky je přibližně ekvivalentní 1 % celkového povrchu těla.

Ve druhé větvi studie výzkumník použil minimálně invazivní postup (sací štěpování puchýřů) k odběru vzorků transplantované kůže a dárcovské kůže – tato metoda dokáže oddělit epidermis od dermis bez vyvolání jizvy. Normálně pigmentovaná oblast na horní části stehna byla anestetizována 1% lidokainem s epinefrinem. Pomocí techniky sacích blistrů výzkumník odstranil malou část epidermis, která nebyla ovlivněna vitiligem, z malé oblasti (4 cm2 nebo 0,6 palce cm2) na stehně pacienta, aby získal dárcovské buňky. Epidermis, která byla sklizena, byla třikrát promyta laktátovým Ringerovým roztokem a poté disociována pomocí trypsinu k oddělení buněk do jediné buněčné suspenze. Oblasti příjemce, které měly být roubovány, byly použity ke sklizni epidermis pomocí odsávacího blistrového zařízení. Polovina disociovaných jednotlivých buněk z dárcovské oblasti (stehna) byla poté transplantována do oblasti postižené vitiligem, o kterou měl pacient zájem (oblast 5 cm2 nebo 0,7 palce2). Kůže sacího puchýřku z míst příjemce byla současně disociována do jediné buněčné suspenze. Část zbývajících buněk (z místa dárce i příjemce) byla podrobena průtokovému třídění za účelem kvantifikace populací melanocytů a keratinocytů a podrobné molekulární analýze (jednobuněčné RNA sekvenování a histologie), aby se charakterizovaly molekulární rysy chronické vitiligo. Zkoušející poté vyhodnotil odpověď na léčbu v transplantovaných oblastech po 1 dni, 1 týdnu, 1 měsíci a 3 měsících a 6 měsících fotografováním a kvantifikací skóre VASI. Tato část studie je dokončena.

Ve třetí větvi studie výzkumník používá minimálně invazivní postup (nasávání puchýřů bez disociace buněk) k odběru vzorků z transplantované kůže a dárcovské kůže – tato metoda může oddělit epidermis od dermis bez vyvolání jizvy. Normálně pigmentovaná oblast na horní části stehna bude anestetizována 1% lidokainem s epinefrinem. Pomocí systému epidermálního odběru, což je technika sacích puchýřů, výzkumník odstraní několik malých částí (asi 128 puchýřů - 1,8 mm v průměru) epidermis nepostižené vitiligem z malé normální oblasti (5 cm2) na stehně pacienta, aby získal dárcovských buněk a za použití běžného podtlakového přístroje pro odebrání čtyř vzorků pro histopatologickou studii (dva z oblasti vitiliga a dva z normální kůže dárce). Epidermis z dárcovské oblasti (stehna) bude poté transplantována do oblasti postižené vitiligem, o kterou má pacient zájem. Také čtyři části z normální kůže a místa příjemce budou odeslány k histopatologickému hodnocení.

Výzkumník poté vyhodnotí odpověď na léčbu v transplantovaných oblastech po 1 dni, 1 týdnu, 1 měsíci a 3 měsících a 6 měsících pomocí fotografie, kvantifikuje změnu v depigmentované ploše a skóre VASI (Vitiligo Area Scoring Index). . Výzkumník také vyhodnotí dva vzorky vitiliga a dva vzorky normální kůže pomocí histopatologie, aby vyhodnotil, kde jsou lokalizovány jedinečné populace buněk identifikované v jejich analýze sekvenování RNA (získané z ramene 2). Vyšetřovatel předpokládá, že jeho transplantační postup povede k vynikající až dobré repigmentaci, což povede k průměrnému 60% snížení plochy povrchu (SD=30 %) od výchozí hodnoty do 6měsíčního sledování. Při velikosti vzorku 5 pacientů dosáhne tato studie 90% síly pro testování této hypotézy na základě oboustranného párového t-testu na hladině významnosti p=0,05. Kromě toho zkoušející porovná výsledky od 7 pacientů odebraných pomocí techniky chirurgické čepele (postup již dokončen a výsledky sledování čekají na schválení) s výsledky od 7 pacientů odebraných se sacími puchýři (dokončeno) a sedmi pacientů z nově navrženého experimentální skupina (k dnešnímu dni dokončeny tři).