Avaliando a Eficácia do Procedimento de Transplante de Queratinócitos de Melanócitos no Tratamento do Vitiligo

No primeiro braço do estudo, uma área normalmente pigmentada do paciente foi anestesiada com lidocaína a 1% com epinefrina. Com um bisturi cirúrgico, o investigador removeu uma pequena porção da epiderme não afetada pelo vitiligo de uma pequena área (2cm2) na coxa do paciente para obter células doadoras. A epiderme que foi colhida com o bisturi cirúrgico foi lavada com solução de Ringer com lactato três vezes e então dissociada usando tripsina para separar as células em uma única suspensão celular. A área receptora a ser enxertada foi submetida a ablação com laser Erbium YAG (granada de ítrio e alumínio). Metade das células isoladas dissociadas da área doadora (coxa) foi então transplantada para a área afetada pelo vitiligo que o participante tem interesse em enxertar (área de 5 cm2).

O investigador então avaliou a resposta ao tratamento nas áreas transplantadas em 1 dia, 1 semana, 1 mês e 3 meses e 6 meses por fotografia e quantificando o escore VASI (Vitiligo Area Scoring Index).

VASI (Vitiligo Area Scoring Index) é a porcentagem de envolvimento do vitiligo e é calculado em termos de unidades manuais. Uma unidade de mão é aproximadamente equivalente a 1% da área total da superfície corporal.

No segundo braço do estudo, o investigador usou um procedimento minimamente invasivo (enxerto de bolha de sucção) para amostrar a pele enxertada e a pele doadora - esse método pode separar a epiderme da derme sem induzir uma cicatriz. Uma área normalmente pigmentada na parte superior da coxa foi anestesiada com lidocaína a 1% com epinefrina. Usando uma técnica de bolha de sucção, o investigador removeu uma pequena porção da epiderme que não foi afetada pelo vitiligo de uma pequena área (4 cm2 ou 0,6 polegadas cm2) na coxa do paciente para obter células doadoras. A epiderme colhida foi lavada com solução de Ringer com lactato três vezes e então dissociada usando tripsina para separar as células em uma única suspensão celular. As áreas receptoras a serem enxertadas foram usadas para colher a epiderme usando um dispositivo de bolha de sucção. Metade das células isoladas dissociadas da área doadora (coxa) foi então transplantada para a área afetada pelo vitiligo que o paciente estava interessado em enxertar (área de 5 cm2 ou 0,7 polegadas2). A pele da bolha de sucção dos locais receptores foi simultaneamente dissociada em uma única suspensão celular. Uma porção do restante das células (tanto do local doador quanto do receptor) foi submetida a classificação de fluxo para quantificar as populações de melanócitos e queratinócitos e a análise molecular detalhada (sequenciamento de RNA de célula única e histologia) para caracterizar as características moleculares de vitiligo crônico. O investigador então avaliou a resposta ao tratamento nas áreas transplantadas em 1 dia, 1 semana, 1 mês e 3 meses e 6 meses por fotografia e quantificação do escore VASI. Este braço do estudo está completo.

No terceiro braço do estudo, o investigador usa um procedimento minimamente invasivo (enxerto de bolha de sucção sem dissociação celular) para amostrar a pele enxertada e a pele doadora - esse método pode separar a epiderme da derme sem induzir uma cicatriz. Uma área normalmente pigmentada na parte superior da coxa será anestesiada com lidocaína a 1% com epinefrina. Usando um sistema de colheita epidérmica que é uma técnica de bolha de sucção, o investigador removerá várias pequenas porções (cerca de 128 bolhas - 1,8 mm de diâmetro) da epiderme não afetada pelo vitiligo de uma pequena área normal (5 cm2) na coxa do paciente para obter células doadoras e utilizando um instrumento de pressão negativa regular para retirar quatro amostras para estudo histopatológico (duas da área de vitiligo e duas da pele doadora normal). A epiderme da área doadora (coxa) será então transplantada para a área afetada pelo vitiligo que o paciente tem interesse em enxertar. Além disso, as quatro porções da pele normal e do sítio receptor serão enviadas para avaliação histopatológica.

O investigador avaliará então a resposta ao tratamento nas áreas transplantadas em 1 dia, 1 semana, 1 mês e 3 meses e 6 meses por ambas as fotografias, quantificando a mudança na área de superfície despigmentada e o escore VASI (Vitiligo Area Scoring Index) . Além disso, o investigador avaliará as duas amostras de vitiligo e duas amostras de pele normal por meio de histopatologia para avaliar onde estão localizadas as populações únicas de células identificadas em sua análise de sequenciamento de RNA (obtidas do braço 2). O investigador levanta a hipótese de que seu procedimento de transplante produzirá uma repigmentação excelente a boa, resultando em uma redução média de 60% na área de superfície (DP = 30%) desde o início até o acompanhamento de 6 meses. Com um tamanho de amostra de 5 pacientes, este estudo alcançará 90% de poder para testar esta hipótese com base em um teste t pareado bilateral com nível de significância p=0,05. Além disso, o investigador irá comparar os resultados dos 7 pacientes colhidos usando a técnica de lâmina cirúrgica (procedimento já concluído e resultados de acompanhamento pendentes) com os resultados de 7 pacientes colhidos com as bolhas de sucção (concluídas) e sete pacientes da nova proposta grupo experimental (três concluídos até o momento).