Evaluering af effektiviteten af ​​melanocytkeratinocyttransplantationsproceduren i behandlingen af ​​vitiligo

I den første arm af undersøgelsen blev et normalt pigmenteret område på patienten bedøvet med 1 % lidocain med adrenalin. Ved hjælp af en kirurgisk kniv fjernede efterforskeren en lille del af epidermis, der er upåvirket af vitiligo, fra et lille område (2 cm2) på patientens lår for at opnå donorceller. Epidermis, der blev høstet med den kirurgiske kniv, blev vasket med Ringers laktatopløsning tre gange og derefter dissocieret under anvendelse af trypsin for at adskille cellerne i en enkelt cellesuspension. Recipientområdet, der skulle podes, blev fjernet med en Erbium YAG(yttrium aluminium granat)laser. Halvdelen af ​​de dissocierede enkeltceller fra donorområdet (låret) blev derefter transplanteret til det område, der er ramt af vitiligo, som deltageren er interesseret i at transplantere (5 cm2 areal).

Efterforskeren evaluerede derefter respons på behandling i de transplanterede områder efter 1 dag, 1 uge, 1 måned og 3 måneder og 6 måneder ved både fotografering og kvantificering af VASI (Vitiligo Area Scoring Index)-scoren.

VASI (Vitiligo Area Scoring Index) er procentdelen af ​​vitiligo involvering og beregnes i form af håndenheder. En håndenhed svarer cirka til 1 % af det samlede kropsoverfladeareal.

I den anden del af undersøgelsen brugte efterforskeren en minimalt invasiv procedure (sugeblistertransplantation) til at prøve den transplanterede hud og donorhuden - denne metode kan adskille epidermis fra dermis uden at fremkalde et ar. Et normalt pigmenteret område på overlåret blev bedøvet med 1 % lidocain med epinephrin. Ved hjælp af en sugeblisterteknik fjernede investigator en lille del af epidermis, der var upåvirket af vitiligo, fra et lille område (4 cm2 eller 0,6 tommer cm2) på patientens lår for at opnå donorceller. Epidermis, der blev høstet, blev vasket med Ringers laktatopløsning tre gange og derefter dissocieret under anvendelse af trypsin for at adskille cellerne i en enkelt cellesuspension. Recipientområderne, der skulle transplanteres, blev brugt til at høste epidermis ved anvendelse af en sugeblisteranordning. Halvdelen af ​​de dissocierede enkeltceller fra donorområdet (låret) blev derefter transplanteret til det område, der var ramt af vitiligo, som patienten var interesseret i at transplantere (5 cm2 område eller 0,7 tommer2). Sugeblisterhuden fra modtagerstederne blev samtidig dissocieret i en enkelt cellesuspension. En del af resten af ​​cellerne (fra både donor- og modtagerstedet) blev udsat for flowsortering for at kvantificere populationerne af melanocytter og keratinocytter og for detaljeret molekylær analyse (enkeltcellet RNA-sekventering og histologi) for at karakterisere de molekylære træk ved kronisk vitiligo. Efterforskeren evaluerede derefter respons på behandling i de transplanterede områder efter 1 dag, 1 uge, 1 måned og 3 måneder og 6 måneder ved både fotografering og kvantificering af VASI-scoren. Denne del af undersøgelsen er afsluttet.

I den tredje del af undersøgelsen bruger efterforskeren en minimalt invasiv procedure (sugeblistertransplantation uden celledissociation) til at prøve den transplanterede hud og donorhuden - denne metode kan adskille epidermis fra dermis uden at fremkalde et ar. Et normalt pigmenteret område på overlåret vil blive bedøvet med 1 % lidocain med adrenalin. Ved at bruge et epidermalt høstesystem, som er en sugeblisterteknik, vil investigator fjerne flere små portioner (ca. 128 blærer - 1,8 mm i diameter) af epidermis upåvirket af vitiligo fra et lille normalt område (5 cm2) på patientens lår for at opnå donorceller og anvendelse af et almindeligt undertryksinstrument til fjernelse af fire prøver til histopatologisk undersøgelse (to fra vitiligoområdet og to fra den normale donorhud). Epidermis fra donorområdet (låret) vil derefter blive transplanteret til det område, der er ramt af vitiligo, som patienten er interesseret i at transplantere. Desuden vil de fire portioner fra den normale hud og modtagerstedet blive sendt til den histopatologiske evaluering.

Efterforskeren vil derefter evaluere respons på behandling i de transplanterede områder efter 1 dag, 1 uge, 1 måned og 3 måneder og 6 måneder ved både fotografering, kvantificering af ændringen i depigmenteret overfladeareal og VASI (Vitiligo Area Scoring Index) score . Undersøgeren vil også evaluere de to vitiligoprøver og to normale hudprøver gennem histopatologi for at vurdere, hvor de unikke populationer af celler identificeret i deres RNA-sekventeringsanalyse er lokaliseret (opnået fra arm 2). Efterforskeren antager, at hans transplantationsprocedure vil give fremragende til god repigmentering, hvilket resulterer i et gennemsnit på 60 % reduktion i overfladeareal (SD=30 %) fra baseline til 6-måneders opfølgning. Med en stikprøvestørrelse på 5 patienter vil denne undersøgelse opnå 90 % magt til at teste denne hypotese baseret på en tosidet parret t-test på p=0,05 signifikansniveau. Derudover vil investigator sammenligne resultaterne fra de 7 patienter høstet ved hjælp af den kirurgiske knivteknik (proceduren er allerede afsluttet og opfølgningsresultaterne afventer) med resultaterne fra 7 patienter høstet med sugeblærerne (færdiggjort) og syv patienter fra det nyligt foreslåede forsøgsgruppe (tre afsluttede til dato).