Evaluación de la eficacia del procedimiento de trasplante de queratinocitos de melanocitos en el tratamiento del vitíligo

En el primer brazo del estudio, se anestesió un área normalmente pigmentada del paciente con lidocaína al 1% con epinefrina. Con un bisturí, el investigador extrajo una pequeña porción de la epidermis que no está afectada por el vitíligo de un área pequeña (2 cm2) en el muslo del paciente para obtener células de donantes. La epidermis que se recogió con el bisturí se lavó tres veces con solución de Lactato de Ringer y luego se disoció usando tripsina para separar las células en una suspensión de una sola célula. El área receptora a injertar fue ablacionada con láser Erbium YAG (granate de itrio y aluminio). Luego, la mitad de las células individuales disociadas del área donante (muslo) se trasplantaron al área afectada por el vitíligo que el participante está interesado en injertar (área de 5 cm2).

Luego, el investigador evaluó la respuesta al tratamiento en las áreas trasplantadas en 1 día, 1 semana, 1 mes y 3 meses, y 6 meses mediante fotografías y cuantificando la puntuación VASI (Vitiligo Area Scoring Index).

VASI (Índice de puntuación del área de vitíligo) es el porcentaje de afectación de vitíligo y se calcula en términos de unidades de mano. Una unidad de mano equivale aproximadamente al 1% de la superficie corporal total.

En el segundo brazo del estudio, el investigador utilizó un procedimiento mínimamente invasivo (injerto de ampolla por succión) para tomar muestras de la piel injertada y la piel del donante; este método puede separar la epidermis de la dermis sin inducir una cicatriz. Se anestesió un área normalmente pigmentada en la parte superior del muslo con lidocaína al 1% con epinefrina. Utilizando una técnica de ampolla de succión, el investigador extrajo una pequeña porción de la epidermis que no estaba afectada por el vitíligo de un área pequeña (4 cm2 o 0,6 pulgadas cm2) en el muslo del paciente para obtener células de donantes. La epidermis que se recogió se lavó tres veces con solución de Lactato de Ringer y luego se disoció usando tripsina para separar las células en una suspensión de una sola célula. Las áreas receptoras a injertar se usaron para recolectar epidermis usando un dispositivo de ampolla de succión. La mitad de las células individuales disociadas del área donante (muslo) se trasplantaron al área afectada por vitiligo que el paciente estaba interesado en injertar (área de 5 cm2 o 0,7 pulgadas2). La piel de la ampolla de succión de los sitios receptores se disoció simultáneamente en una suspensión de células individuales. Una parte del resto de las células (tanto del sitio donante como del receptor) se sometió a clasificación por flujo para cuantificar las poblaciones de melanocitos y queratinocitos y a un análisis molecular detallado (secuenciación e histología de ARN unicelular) para caracterizar las características moleculares de vitíligo crónico. Luego, el investigador evaluó la respuesta al tratamiento en las áreas trasplantadas en 1 día, 1 semana, 1 mes y 3 meses, y 6 meses mediante fotografías y cuantificando la puntuación VASI. Este brazo del estudio está completo.

En el tercer brazo del estudio, el investigador utiliza un procedimiento mínimamente invasivo (injerto de ampollas por succión sin disociación celular) para tomar muestras de la piel injertada y la piel del donante; este método puede separar la epidermis de la dermis sin inducir una cicatriz. Se anestesiará un área normalmente pigmentada en la parte superior del muslo con lidocaína al 1% con epinefrina. Utilizando un sistema de recolección epidérmica que es una técnica de succión de ampollas, el investigador extraerá múltiples porciones pequeñas (alrededor de 128 ampollas de 1,8 mm de diámetro) de la epidermis no afectada por el vitíligo de un área normal pequeña (5 cm2) en el muslo del paciente para obtener células del donante y usando un instrumento de presión negativa regular para extraer cuatro muestras para estudio histopatológico (dos del área de vitíligo y dos de la piel normal del donante). A continuación, se trasplantará la epidermis de la zona donante (muslo) a la zona afectada por vitíligo que el paciente esté interesado en injertar. Además, las cuatro porciones de la piel normal y el sitio receptor se enviarán para la evaluación histopatológica.

Luego, el investigador evaluará la respuesta al tratamiento en las áreas trasplantadas en 1 día, 1 semana, 1 mes y 3 meses, y 6 meses mediante fotografías, cuantificando el cambio en el área de superficie despigmentada y la puntuación VASI (Vitiligo Area Scoring Index). . Además, el investigador evaluará las dos muestras de vitíligo y las dos muestras de piel normal a través de histopatología para evaluar dónde se localizan las poblaciones únicas de células identificadas en su análisis de secuenciación de ARN (obtenidas del brazo 2). El investigador plantea la hipótesis de que su procedimiento de trasplante producirá una repigmentación de excelente a buena, lo que dará como resultado una reducción media del 60 % en el área de superficie (DE = 30 %) desde el inicio hasta los 6 meses de seguimiento. Con un tamaño de muestra de 5 pacientes, este estudio alcanzará un poder del 90 % para probar esta hipótesis con base en una prueba t pareada de dos colas con un nivel de significancia de p=0,05. Además, el investigador comparará los resultados de los 7 pacientes recolectados con la técnica de bisturí (procedimiento ya completado y resultados de seguimiento pendientes) con los resultados de 7 pacientes recolectados con ampollas de succión (completados) y siete pacientes de la nueva propuesta. grupo experimental (tres completados hasta la fecha).